产胞外多糖菌株的鉴定和生化特性研究
目录
摘要. 3
关键词. 3
Abstract...........................................................3
Key words...........................................................3
1材料与方法 6
1.1供试材料 6
1.1.1供试土壤 6
1.1.2供试菌株 6
1.1.3供试培养基 6
1.1.4供试仪器 6
1.2 供试方法 6
1.2.1形态特征的观察 6
1.2.2菌株的分子生物学鉴定 6
1.2.3 菌株生长曲线的测定 7
1.2.4胞外多糖（EPS）含量的测定 7
1.2.5不同培养条件对菌株的生长的影响 8
1.2.6数据处理 8
2结果与分析 8
2.1 分离和筛选结果 8
2.2菌株形态 8
2.3菌株16S rRNA基因的同源性分析 12
2.4菌株生长曲线 13
2.5 不同培养条件下菌株生长特性 14
2.5.1温度 14
2.5.2 pH 14
2.5.3装液量 15
2.5.4碳源 15
2.5.5氮源 16
3讨论 17
*51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072*
致谢 18
参考文献： 18
产胞外多糖菌株的鉴定和生化特性研究
农业资源与环境学生 刘妍
引言
引言 细菌作为微生物中庞大的一支，目前已报道的细菌种类达近万种，而且还在不断增加，越来越多未知菌种的出现使细菌的分类鉴定与其研究应用具有了同等重要的地位。[1]只有准确的鉴别出细菌的类别、确定细菌的功能，才能达到更好地为人类所用或准确的豁免其伤害的目的。本实验所用菌种是实验室从土壤中分离出来的未知菌株，为了研究这些菌株在土壤中的功能与作用，首先对其进行种属鉴定。
目前细菌分类鉴定主要包括表型鉴定法和分子遗传学鉴定法，涵盖以下4个水平：细菌形态与生理生化水平、 蛋白质水平、 细胞组分水平和核酸水平。前三种属于表型鉴定法，包括常规鉴定法、数值分类鉴定法和化学分类鉴定法；最后一种属于分子遗传学鉴定法，主要是对染色体和质粒进行分析，包括核酸杂交、 G + C mol % 含量测定、PCR技术、16S rRNA基因、16～23S rRNA 序列分析以及全基因组测序等[2]。
起初应用最多的是细菌形态和生物化学方法，它操作简单、现象直观、费用低廉，是最经典常用的细菌鉴定方法。蛋白质水平的细菌鉴定方法包括蛋白图谱分析、免疫诊断技术和氨基酸序列分析等[3]。
现在应用比较广泛的自动化鉴定系统主要包括 ：Biolog 、MIDI 、Autosceptor 、Vitek AMS( Automated Microbic System) [6] 、MicroScan 、Sensititte 、Enterotube 、Crystal 等鉴定系统。
此外，基于自动化程度的化学分类鉴定方法也非常常用，它通过化学测定得到细菌基因组和各细菌组分的化学数据[7]。目前经常使用的有红外光谱和高效液相色谱法[1] 。
对比于其他细菌鉴定方法，目前应用最多、测定最准确的是分子遗传学鉴定方法。如利用16SrDNA序列分析和Biolog法鉴定产脂肪酶菌[4]，畜禽疫病诊断当中荧光抗体技术的应用[5]。彩媛[6]等运用PCRSSCP（单链构象多态性）鉴定出1个属的23个种的细菌；Kullen[7]等人采取RAPD（随机扩增DNA多态性）法对从人体内分离的各类双歧杆菌进行鉴别；Hopkins KL[8]等人采用扩增片段长度多态性的方法鉴定出了大肠埃希菌、尿路菌、空肠弯曲菌等；Deleg[9]等用DNArRNA杂交研究了400多种菌，而且它们属于不同科属。此外，第二代DNA测序技术的高通量测序也蓬勃的发展起来，它能一次并行上千万个DNA分子，使原本效率低下的DNA测序工作变得快速高效[10]。
在人们的日常生活和各领域的生产活动中都离不开细菌的活动，对分离细菌的分类鉴定可以帮助形成一个逐渐清晰的细菌种发育树，将各类细菌分门别类嵌入其中，此后每发现一种细菌就可以从发育树上找出其位置以确定其生活习性、功能作用等，这不仅使目前所做的研究达到其目的，更对未来的研究进程有着非凡的意义。
1材料与方法
1.1供试材料
1.1.1供试土壤
贵州烟草科学研究所玉米烟草轮作定位点已经进行了7年的长期定位试验，试验点设于龙岗试验基地。
1.1.2供试菌株
实验所用菌株为实验室已纯化菌株，11号菌和15号菌。
1.1.3供试培养基
阿须贝培养基：甘露醇（或蔗糖） 10g，酵母粉 0.4g，K2HPO43H2O 0.5g，MgSO47H2O 0.2g，NaCl 0.2g，CaCO3 1g，琼脂 20g ，去离子水 1L ，pH 7.47.6 115℃ 灭菌30min，液体培养基不加琼脂。
无N培养基：蔗糖 10g，K2HPO4 0.5g，MgSO47H2O 0.2g，CaCO3 1g，NaCl 0.1g，去离子水 1L，PH 7.07.5。
1.1.4供试仪器
PCR扩增仪、震荡培养箱（ZQZY70B、ZHTY70）、高速冷冻离心机（centrifuge 5418、centrifuge 5424）、大型离心机（eppendorf）电泳系统(HZ120)、隔水式恒温培养箱（GRP9160）、20℃低温冰箱（MDFU339C）、三孔恒温水浴锅（HS800D）、酶标仪（SpectraMax M5，Molecular Devices，USA）。
1.2 供试方法
1.2.1形态特征的观察
观察菌落的形态特点，包括形状、大小、表面、质地、隆起程度、透明度、颜色和边缘等。然后进行墨水负染色法染色观察，细胞形态和产荚膜情况。
墨水负染色法：加一滴无菌水在载玻片上，挑少量菌苔于液体上使之呈稀薄悬浮液，加一滴黑色碳素墨水与悬浮液混合均匀（墨水用滤纸过滤两次除去其中颗粒物），轻轻加盖一片盖玻片，用吸水纸于盖玻片的一侧吸干多余液体，风干后在油镜下观察。
1.2.2菌株的分子生物学鉴定
(1)菌株的DNA提取
原文链接：http://www.jxszl.com/hxycl/hxyhj/46526.html
