目录
摘 要 Ⅰ
ABSTRACT Ⅱ
第一章 文献综述 1
1 研究目的与意义 1
2 国内外研究进展 1
2.1 环境中抗生素的来源和传播途径 2
2.1.1 水环境 2
2.1.2 畜禽粪便 2
2.1.3 大气环境 2
2.1.4 动植物 2
2.2 土壤环境中抗性细菌的来源和多样性 3
2.3 抗生素的抗性研究方法 4
2.3.1 细菌培养法 4
2.3.2 PCR技术 4
2.3.3 宏基因组学 4
3 结论与应用前景 4
第二章 叶菜类蔬菜中抗生素抗性细菌的数量和优势种群 6
1 材料与方法 6
1.1 生物材料与试剂 6
1.1.1 仪器 6
1.1.2试剂 6
1.1.3 样品预处理 6
1.2 实验方法 6
1.2.1 研究方法 6
1.2.2 抗性细菌计数与优势抗性细菌的抗性谱 7
1.2.3 抗性细菌菌株基因组DNA提取 7
1.2.4 数据处理 8
2 结果与分析 8
2.1 叶菜类蔬菜中抗性细菌的数量 8
2.2 叶菜类蔬菜中优势抗性细菌的抗性谱 9
2.3 叶菜中优势抗性细菌的分离和鉴定 18
2.4 叶菜中优势抗性细菌的系统进化分析 20
2.4.1 香菜根部优势抗性细菌系统进化树 20
2.4.2 香菜茎叶优势抗性细菌系统进化树 23
2.4.3 生菜茎叶优势抗性细菌系统进化树 25
3 讨论 27
第三章 结论与展望 28
1 结论 28
2 展望 28
参考文献 29
致 谢 32
叶菜中抗生素抗性细菌的数量和优势种群
摘 要
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田土壤—蔬菜体系中未完全降解的多种抗生素以及由其导致的抗性致病细菌已对人体健康和生态环境造成严峻的威胁。基于此，本项目设置初始浓度2 µg/ mL的强力霉素、多粘菌素、罗红霉素、卡那霉素、氯霉素和氨苄青霉素六种抗生素为筛选条件，采用梯度稀释涂布平板计数法，研究了人们日常生食的香菜和生菜两种叶菜类蔬菜根部和茎叶部中各种抗生素抗性细菌的数量；挑选其中的优势种群为检测对象，进一步设置初始浓度为0、2、4、8、16、32、64、128 µg/ mL的六种抗生素筛选条件，检测各优势菌株的抗性谱；进一步提取各优势菌株的总DNA后，通过PCR技术体外扩增各菌株的16S rRNA基因序列并对其进行测序分析，获得的序列经同源性比对分析确定各菌株的进化地位；在此基础上，系统地分析了这两种叶菜根部和茎叶部中抗性细菌的数量、优势种群、种群多样性以及分布特征。结果表明，香菜根部中抗性细菌数量为1.92×104 ~1.68×105 CFU/g，茎叶部的抗性细菌数量为3.40×103 ~ 2.93×104 CFU/g，其中多粘菌素抗性细菌数量最多，卡那霉素次之；生菜茎叶部的抗性细菌数量为1.32×102 ~1.03×103 CFU/g，其中氨苄青霉素抗性细菌数量最多，强力霉素次之。大部分抗性细菌在相应的抗生素浓度达128 µg/ mL时无法生长，但有个别菌株仍可生长，其抗性机制尚需进一步研究。总体来看，香菜和生菜中的各类抗性细菌优势种群皆为Bacillus sp.，占比为31.2%~73.1%；而其他细菌种群占比相对较少。该研究初步明确了生食叶菜类蔬菜中的抗性细菌数量、优势种群以及各优势菌株的抗性谱，研究结果可为评估叶菜类蔬菜中的抗性细菌现状提供依据。

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