多环芳烃（PAHs）是一种当前环境中普遍存在的且具有“致畸、致癌、致突变”三大效应的持续性有机污染物，在环境中易被植物体吸收和积累，它能够通过食物链的传递富集从而严重危害农产品的安全和人类健康。PAHs中的典型代表就是具有4环结构的芘，所以芘常常被用来作为生物降解PAHs实验的模型分子。因此，本实验将功能内生细菌PRd5通过浸种定殖到被在不同浓度芘污染营养液中生长的小白菜中，研究结果显示为染毒4d时，在0.5 mg·L-1污染浓度下，SS组的小白菜鲜重、干重比CK组提高了25.00%、5.88%，该菌株提高了小白菜的生物量；同时，在0.1 mg·L-1污染浓度下，染毒4 d时，SS的小白菜根和茎叶芘含量比CK减少了52.02%、83.00%，表明了该菌株能有效降低污染物在其中的积累量。此外，接菌组中两种多环芳烃降解酶的活性显著高于未接菌组。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1 实验材料 2
1.2实验方法 3
1.2.1小白菜水培实验3
1.2.2降解菌株抗性标记3
1.2.3芘污染霍格兰营养液配置3
1.2.4小白菜侵染和培养3
1.2.5小白菜生物量的测定4
1.2.6小白菜体内芘的提取与测定4
1.2.7培养液中芘的提取与测定 4
1.2.8小白菜中菌株PRd5数量检测4
1.2.9小白菜体内多酚氧化酶的提取与测定4
2结果与分析4
2.1功能内生细菌的定殖效率4
2.2小白菜的生物量测定与分析5
2.3培养液中芘的提取与测定结果分析5
2.4小白菜体内芘的提取与测定结果分析5
2.5小白菜体内过氧化物酶的测定6
2.6小白菜体内多酚氧化酶的测定7
3讨论8
3.1功能内生细菌对植物生长及芘降解的影响8
3.2功能内生细菌对植物体内多环芳烃氧化酶的影响8
致谢8
参考文献8
 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
植物功能内生细菌在农作物体内的定殖
引言
引言
随着化工产业的发展，全国越来越多的土地受到了污染。当前，由于土壤有机污染而引起的植物体污染风险逐年升高，植物污染问题已经成为了全世界环境领域关注的核心 [1]。多环芳烃（Polycyclic aromatic hydrocarbons, PAHs）是由至少两个苯环按照线形排列、弯接或并和等方式结合在一起的有机化合物[2,3]。多环芳烃普遍存在于我国的广大的土壤环境中，并且是具有“致畸、致癌、致突变”的一种可持续存在且难以降解的有机污染物，由于它能够被植物体吸收和在体内不断的积累，所以多环芳烃会通过自然界的食物链进行传递积累而严重地危害动物和人类的身体健康[4 5 6]。多环芳烃在水中溶解度很低并具有憎水性，然而大多数具有憎水性质的有机污染物容易被土壤固相所吸附，土壤也因此成为多环芳烃易于聚集的主要的环境场所 [7]。因此它是土壤最主要的有机污染物，如何有效降低土壤中多环芳烃的含量，对于保障我国农产品的安全和人类健康都有着十分重要的意义。
最近几年来，土壤环境污染处理的热点研究之一是将具有PAHs降解功能的植物内生细菌通过不同方式定殖到植株中来降低土壤中多环芳烃的污染。植物内生细菌是能够生存在植株健康组织的细小缝隙或植株体的细胞内，且在植物的保护下具有对外部环境的不利因素抗性极高的性质，还能与宿主植物共生互惠的一种微生物[8]。一些学者提出，植物内生细菌具有不同的功能，如提高植株的抗逆性、降低植株病虫害的发生率而且还具有促进作物产量增高等生理生态功能，不仅如此，植物内生细菌还可以当作导入外源的功能基因的载体使用。同时，一些研究人员通过将内生细菌定殖在植株体内时发现，定殖成功的功能内生细菌不仅能够促进植株的生长，还能有效提高植株吸收和降解其生长环境中的有机污染物的能力[9 10 11 12]。一些学者成功从生长在长期被石油所污染的土壤上的植物体内分离和筛选出了两种植物内生细菌菌株7J2 和12J1，这两个菌株具有能降解菲、芘的特性；该试验的结果表明，该菌株能在小麦体内较好的定殖并且能起到促进小麦生长的作用，而且对供试PAHs有着良好的降解性能 [13 14]。
本实验所用为一株实验室已筛选好的高效芘降解功能内生细菌PRd5通过浸种方式定殖在小白菜内，小白菜通过温室水培试验，分析了定殖菌株PRd5对小白菜生长发育的影响，探讨了菌株PRd5定殖在小白菜体内后对小白菜吸收降解其生存环境中的多环芳烃的影响；初步研究了在对小白菜定殖了功能植物内生细菌PRd5后，其茎叶中过氧化物酶和多酚氧化酶的活性的变化。该研究对防治土壤有机污染、降低农作物有机污染的风险以及保障农产品健康安全提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1．1 实验材料
实验植物：小白菜
实验所用污染物：芘（纯度大于98%），相对分子质量为202.26、纯水中的溶解度为0.12 mg/L.
甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。
抗生素产于上海捷倍思公司，有氨苄青霉素（Amp）、红霉素（Et）。
植物功能内生细菌：实验室已筛选好的芘降解菌株PRd5。
试剂及培养基：
LB培养基（gL1），配方为胰蛋白胨10.0，酵母粉5.0，NaCl 10.0，pH 7.0。
1/10 LB培养基，用无菌水按1：10的比例稀释LB培养基。
芘降解培养基：2 gL1的芘丙酮溶液通过0.22 μm滤膜除菌，取实验所需用量加入到经过已高温高压灭菌的锥形瓶中，后加入已高温高压灭菌完全的1/10 LB培养基中，使芘的终浓度达到本次实验所设计的目标浓度100mgL1。
MSM抗性培养基：向芘降解培养基中（约60℃）加入氨苄青霉素、红霉素，使Amp和Et两种抗生素的最终终浓度达到100 mg/L。
霍格兰营养液（mg/L）配方参考文献（王万清，2015）[15]。
所用仪器：南京普优超纯水机，离心机，新苗隔水式恒温培养箱，UVmini1240紫外分光光度仪，超声波细胞粉碎机，SPMax2300A光吸收型全波长酶标仪，立式压力蒸汽灭菌锅，KQ300DE医用数控超声波清洗器， RE201D旋转蒸发仪，CHRIST冷冻干燥机，卢湘仪TD5AWS离心机，直径为0.7cm×25cm层析柱，岛津LC20AT高效液相色谱仪，配有SPD2A紫外检测器，RF10AXL荧光检测器，CTO20A柱温箱，Ф4.6×250mm Inertsil ODSPPAHs专用反相色谱柱。

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