响应曲面法优化灵芝超细粉多糖提取工艺的研究
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1材料与设备4
1.1材料与试剂4
1.2仪器与设备 4
2实验方法 4
2.1溶液配制4
2.1.1 5％苯酚溶液的配置4
2.1.2 10％三氯乙酸溶液配置4
2.1.3 1.0 mol/L氢氧化钠溶液的配置4
2.3标准曲线的绘制4
2.4灵芝多糖的提取5
2.5灵芝多糖的测定5
2.6实验设计5
2.6.1单因素实验设计5
2.6.2响应曲面实验设计5
3结果与分析6
3.1单因素实验结果6
3.1.1提取时间对多糖提取的影响6
3.1.2料液比对多糖提取的影响6
3.1.3提取温度对多糖提取的影响7
3.2响应曲面法优化实验结果7
3.2.1BoxBehnken实验设计结果7
3.2.2响应曲面实验方差分析及显著性检验8
3.2.3响应曲面分析8
3.2.4提取条件的优化结果11
4讨论 11
致谢11
参考文献12
响应曲面法优化灵芝超细粉多糖提取工艺的研究
引言
引言
灵芝是担子菌门担子菌纲多孔菌科灵芝属药用真菌[1]，在我国已有悠 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072*
久的药用历史，《本草纲目》等多部古代本草著作都有记载[2] 。灵芝性平味甘，归心、肺、肝、肾经。补气安神、止咳平喘，用于心神不宁，失眠心悸，肺虚咳喘、虚劳短气、不思饮食[3]。其中灵芝多糖是灵芝中一类主要的活性成分，已在功能食品和临床上得到广泛应用。灵芝多糖的提取方法主要有水提法、碱提法、超声提法等常用方法，其中超声波会使大分子的多糖被破坏或者使更多小分子物质溶出，降低了灵芝多糖的分子量[4]。响应曲面法以其试验次数少、周期短，求得回归方程精度高、能研究几种因素间交互作用的诸多优点，在很大程度上满足实验要求。所以本实验采用水提法制备灵芝多糖，结合响应曲面法对灵芝多糖的提取时间、料液比、提取温度三个因素三个水平进行中心组合试验研究，分析得出最佳提取工艺参数，为今后扩大应用和工业化生产提供依据和参考。
1 材料与设备
1．1 材料与试剂
灵芝超细粉（生产批号：14041801 生产厂家：武艺寿仙谷中药饮片有限公司）；苯酚（广东光华科技股份有限公司）；硫酸（南京化学试剂有限公司）；三氯乙酸（国药集团化学试剂有限公司）；乙醇（南京化学试剂有限公司）；氢氧化钠（汕头市西陇化工厂有限公司）；等均为分析纯。
1．2 仪器与设备
BS124S电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DFII集热式磁力加热搅拌器 (江苏金坛市荣华电子有限公司)；V1001型旋转浓缩仪（上海爱朗仪器有限公司）；TGL20M 高速离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)；TU1800S紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。
2 实验方法
2．1 溶液配置
2．1．1 5％苯酚溶液的配置 将分析纯的苯酚加热融化，用移液枪准确量取5 mL苯酚至100 mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，得5％苯酚溶液，保存于棕色玻璃瓶内，每次实验现配现用。
2．1．2 10％三氯乙酸溶液配置 准确称取10 g三氯乙酸于烧杯中，加入90 mL蒸馏水溶解，配制成10％的三氯乙酸溶液，转移至棕色瓶内保存，每次实验现配现用。
2．1．3 1.0 mol/L氢氧化钠溶液的配置 准确称取4 g氢氧化钠于烧杯中，加蒸馏水溶解并待其冷却后，定容至100 mL容量瓶中，配制成浓度为1.0 mol/L氢氧化钠溶液。
2．2 灵芝超细粉的醇提 准确称取灵芝超细粉50 g于1000 mL烧瓶中，按1:10的料液比加入95％乙醇500 mL，在微沸状态下磁力搅拌回流2 h后，再进行减压抽滤，所得滤渣按上述条件重复一次，所得滤渣置于50 ℃烘箱中挥干乙醇即可，备用。
2．3 标准曲线的绘制[5] ~[7] 精确称量在105 ℃、2 h烘干至恒重的葡萄糖0.010 g，溶解并定容至100 mL容量瓶中，得到浓度为0.100 mg/ml的葡萄糖标准溶液，转移至指定玻璃瓶内，备用。用校准后的移液枪准确移取0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL葡萄糖标准溶液于10mL具塞试管中，并分别加入蒸馏水使其总体积为1 mL，另取一具塞试管并用移液枪准确量入1.0 mL蒸馏水，以此试管作为空白对照。各具塞试管分别依次不间断加入5％苯酚1.0 mL、分析纯浓硫酸5.0 mL，迅速剧烈摇匀，于室温下静置30 min后，在490 nm处测定吸光度。以葡萄糖含量（ug）为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线见图1，得其回归方程为A = 1.115 x 0.001（R² = 0.994）
图1 多糖测定标准曲线
2．4 灵芝多糖的提取 准确称取经醇提处理后的灵芝超细粉2 g，根据单因素实验设计，分别在一定提取时间、料液比、提取温度条件下进行灵芝多糖的提取。提取液经旋转浓缩至20 mL左右，加入4倍体积95％乙醇进行醇沉过夜，经4800 r/min离心20 min，所得沉淀静置，挥干多余乙醇后，用20 mL蒸馏水复溶，加入等体积10％的三氯乙酸[8],4 ℃下静置2 h，5600 r/min下离心10 min，得上清液，用1.0 mol/L的氢氧化钠中和至中性[9]，旋转浓缩至20 mL左右，再次加入4倍体积95％乙醇进行醇沉过夜，经4800 r/minxin离心20 min，所得沉淀静置，挥干多余乙醇后，用蒸馏水复溶，定容至100 mL容量瓶，转移至指定玻璃瓶内，备用。
2．5 灵芝多糖的检测 用移液枪准确移取不同条件下反应得到的灵芝多糖样品1.0 mL于具塞试管中，分别依次不间断加入5％苯酚1.0 mL、分析纯浓硫酸5.0 mL，迅速剧烈摇匀，于室温下静置30 min后，在490nm处测定吸光度A，并根据葡萄糖标准曲线计算灵芝多糖的质量。多糖提取率（％）=提取液中灵芝多糖的重量/供试灵芝粉的质量×100％。
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