:本研究通过在伽马射线灭菌的香蕉抑病土壤和导病土壤中，分别接种不同浓度抑病土壤悬液培养2个月后，获得具有不同细菌和真菌丰度的两种土壤，然后在不同处理中接种相同浓度的病原菌孢子悬液进行室内培养，研究土壤微生物多样性与病原菌入侵直接的关系。研究结果表明，土壤理化对微生物群落建成有显著影响，在抑病土壤中，稀释不同倍数培育的微生物差异，可能是抑病型微生物抑制病原菌入侵的关键。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1供试土壤2
1.1.2供试菌株2
1.1.3供试培养基和试剂2
1.1.4仪器2
1.2方法 2
1.2.1室内土壤培育及分析2
1.2.2土壤悬液制备3
1.2.3孢子悬液制备3
1.2.4不同浓度土壤悬液培育实验3
1.3样品采集和提取3
1.3.1样品采集3
1.3.2土壤总DNA提取3
1.3.3细菌总数和真菌丰度定量3
1.3.4土壤中尖孢镰刀菌的丰度定4
1.4数据处理与分析 4
2结果与分析4
2. 1土壤理化因子分析4
2. 2 土壤细菌、真菌、病原菌定量数据分析4
2.2.1培育完两个月后细菌真菌数据分析4
2.2.2加完病原菌后3、12、21、28天细菌数据分析5
2.2.3加完病原菌后3、12、21、28天真菌数据分析6
2. 2. 4 加完病原菌后3、12、21、28天尖孢镰刀菌数据分析7
2.2.5土壤微生物丰度和病原菌丰度相关性分析8
3讨论8
致谢9
参考文献9
香蕉抑病型土壤微生物多样性与病原菌入侵关联研究
引言
引言
香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型引起的病害，是世界上分布最广的毁灭性病害之一，其分布范围广，发病率高（患病蕉园发病率为 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
1040%，严重时达90%）[1]。香蕉枯萎病严重影响了我国的香蕉产业并造成了巨大的经济损失[2] 。当前的主要防治措施包括化学防治、生物防治和培育抗病品种等。生物防治具有高效性和安全性等特点，是目前防治土传病害的重要方法之一。微生物是土壤养分的储存库和植物生长可利用养分的一个重要来源，是衡量土壤肥力水平和土壤养分资源生物有效性的重要活性指标[3]，土壤微生物影响土壤质量，土壤生态系统微生物多样性和植物生长状况。土壤微生物与土壤健康及土壤抑病性关系密切[4]。微生物中的细菌能推动陆地生态系统的生物、化学和物理过程，其中假单胞菌，芽孢杆菌和伯克氏菌都被证实能够让植物免受病原体的侵害[58]。现在国内外已发现不少能有效防控香蕉枯萎病的拮抗菌，例如荧光假单胞菌[910]，绿脓杆菌[11]，枯草芽孢杆菌[12]，生防荧光假单胞菌[13]，香蕉内生链霉菌，哈茨木霉 [14]和地衣芽孢杆菌[15]等。
抑病型土壤指的是土壤中病原菌不能够有效定殖，或者即使定殖后，但危害依然很小或没有危害，再或者就是病原菌能后定殖并且造成一时危害，但随后即使存在病原菌发病依然很轻的那类土壤[16]。已发现的抑病型土壤包括土豆链霉菌[17]、小麦全蚀病菌[18]和西瓜尖孢镰刀菌，已有研究表明在抑病型土壤中的固有微生物群落或者特殊的亚种群拥有能抑制寄主植物免受病原体入侵的潜能，即使在易感宿主植物和气候条件都有利于疾病发展的条件下，其发病率仍然维持较低水平[19][16]。抑制土传病害依赖土壤微生物群体作用，土壤微生物群落越丰富、物种越均匀、多样性越高时抑制病原菌能力越强。早前Nitta和Workneh [2021]就发现土壤微生物多样性跟土传病害的防治有关。Rovira & Wildermuth[22]也指出肥沃土壤中丰富的微生物群落能减少土著植物病原体带来的危害性。Workneh [23]等人研究发现有机管理土壤中番茄根际放线菌的功能性种群多样性指数要高于常规管理土壤，并且多样性指数与由番茄枯萎病引起根部病害的严重度呈负相关。
通过本实验室研究团队前期研究发现，海南香蕉主产区有连作多年而土传枯萎病发病率较低的蕉园，其土壤为香蕉抑病型土壤[12]。但是现有研究并未搞清抑病型土壤中的何种微生物组分对抵御病原菌入侵起到了至关重要的作用。因此，客观分析抑病型土壤微生物多样性在抵御病原菌入侵时的作用是研究土传病害的关键。本论文采用荧光定量PCR方法，通过比较接种了不同浓度抑病土壤悬液的导病土壤和抑病土壤对外来病原菌入侵后的响应，探究微生物多样性与病原菌定值的关系，为进一步研究和调控香蕉枯萎病抑病型土壤微生物区系提供科学依据，也为防控香蕉枯萎病提供基础。
1 材料与方法
1 . 1 材料
1．1．1 供试土壤
室内培养实验所用土壤采自海南天地人生态农业股份有限公司低病蕉园和高病蕉园。土壤采集试验点位于我国海南省，采样地域年降雨量可达2000 mm左右；土壤类型为砖红壤。
1．1．2 供试菌株
本实验所用菌株是含潮霉素抗性基因的香蕉枯萎病病原菌，以下简称RFOC，由本实验室构建（未发表）。
1．1．3 供试培养基和试剂
PDA培养基：去皮马铃薯200g，将其切成12 cm小块，煮沸20 min后经纱布过滤，取滤出液，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1L，115℃高压蒸汽灭菌30 min。
土壤DNA提取试剂盒为 MoBio（MoBio Laboratories, Carlsbad, CA,USA）。

原文链接：http://www.jxszl.com/hxycl/zyyhj/561026.html