本研究从黑色素合成通路的分子角度探讨红罗非鱼体色变异情况，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术定量分析未知模板。结果显示，TYRP1基因在红斑体色类型皮肤中的表达量显著地高于其他体色（P<0.05）；DCT基因在粉白体色类型和黑斑体色类型的皮肤组织中表达量显著的高于红斑体色类型（P<0.05）；TYRP1基因在以色列、台湾与马来西亚品系中均有显著性差异（P<0.05），由实验结果得知TYRP1和DCT基因的表达量与鱼种类有一定的相关性,说明两基因在体色合成中具有重要影响。为开展红罗非鱼体色变异及体色遗传分子辅助育种研究提供参考数据。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1实验材料与方法2
1.1实验材料 2
1.2实验仪器 2
1.2.1试剂盒 2
1.2.2实验材料2
1.2.3主要生物学软件2
1.3实验方法2
1.3.1组织RNA提取2
1.3.2 RNA反转录反应 3
1.3.3 引物的设计合成3
1.3.4各基因中间片段的扩增3
1.3.5 DNA溶液的稀释3
1.3.6 实时荧光定量分析3
1.3.7 数据统计分析3
2 结果与分析3
2.1 实验结果4
2.1.1 TYRP1和DCT在三个群体不同皮肤部位表达差异 4
2.1.2马来西亚品系不同体色间差异9
3讨论 9
3.1 TYRP1基因在不同组织中的差异性表达分析9
3.2 DCT基因在不同组织中的差异性表达分析10
3.3 DCT和TYRP1基因在三个不同群体的皮肤组织中表达量的差异分析10
致谢 11
参考文献 11
TYRP1基因和DCT基因在不同群里红罗非鱼中的差异表达研究
引言
红罗非鱼(Oreochromis mossambicus×O.niloticus)又称彩虹鲷[1]，属于鲈形目（P *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
erciformes），鲈亚目（Percoidef），丽鱼科（Cichlidae），罗非鱼属（Oreochromis）。是由尼罗罗非鱼(O.niloticus)与体色变异的莫桑比克罗非鱼(O.mossambicus)杂交,经多代选育而成的优良品种[23]。中国罗非鱼养殖主要集中在广东、海南、广西、福建。在红罗非鱼越冬养殖的过程中发现，红罗非体色会出现黑色或者红色斑纹，使红罗非鱼的经济价值下降。因此研究红罗非鱼体色形成机理对于遗传育种和与鱼类体色遗传具有重要作用。鱼类体色变异研究一直是系统发育、脊椎动物遗传学和进化生物学的重要研究内容。朱艳菲等[4]用荧光定量PCR技术检测发现TYRP1基因在红褐色乌苏里貉皮肤组织中的表达量是野生型乌苏里貉皮肤组织的0.93倍。Lyons等[5]研究发现猫TYRP1基因289bp处一个无义突变可能与猫的肉桂色毛色表型相关。
TYRP1和DCT基因在红罗非鱼体色研究过程中的表达情况相关研究报道极少，本研究通过研究2个基因在不同体色红罗非鱼各组织的差异表达情况，从而证明TYRP1和DCT基因在调控红罗非鱼体色变异方面是否具有显著作用，为今后开展红罗非鱼体色变异及体色遗传分子辅助育种研究提供参考数据。
1 材料与方法
1．1实验材料
本试验中的中国台湾红罗非和以色列红罗非群体是2014年从福建引进，在当地已进行了多年的驯化养殖，仍具有较明显的区域品种特征。马来西亚红罗非是无锡淡水渔业研究中心2009年从马来西亚引进，并在宜兴实验基地驯养繁殖。在养殖过程中发现，马来西亚红罗非群体体色分化较严重，根据其体色分化程度，将马来西亚红罗非鱼按体色划分为3种，分别为“红斑”（红斑面积超过二分之一）、“粉白”（全身体表均为粉白色）、“黑斑”（黑斑面积超过四分之一）三种体色类型。实验材料选择身体健壮，健康状况良好的红罗非鱼。马来西亚品系三种体色类型各取3尾，中国台湾和以色列群体各取3尾，平均体重566.88±14.51g，体长23.05±0.23cm。每尾鱼采集背部皮肤、腹部皮肤、肌肉、肠、心、脑共六种组织。样品用液氮速冻后，放于80℃冰箱中保存待用。
1．2 实验仪器
仪器名称
型号
台式高速离心机
RJTGL1650
PCR 扩增仪
T100 Thermal Cycler
凝胶成像系统
中通量组织研磨破碎仪
实时荧光定量PCR仪
Tanon 2500
TL2010S
Applied Biosystems7500
超低温冰箱
酶标仪
微量核酸蛋白测定仪
HaierDW86L486
BioTek –eno
NANO DROP 2000
表1实验器材
1.2.1试剂盒
EASYspin 组织/细胞RNA快速提取试剂盒，原平皓生物;
PrimeScript™ RT Master Mix，TAKARA;
SYBR Premix Ex Taq II，TAKARA;
1.2.2实验材料
组织研磨器配套的钢珠，剪刀、镊子，解剖盘，0.2 ml PCR 管，1.5 ml和2.0 ml离心管，2.0ml冻存管，灭菌丁腈手套，一次性PE手套，一次性医用口罩等。
1.2.3 主要生物学软件

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