海藻糖(Trehalose)代谢相关基因对高等植物的生长发育及抗逆生理具有重要作用,以UDP-葡萄糖和6-磷酸葡萄糖为底物的海藻糖合成途径广泛存在于细菌、真菌和植物体内,其中由海藻糖-6-磷酸合酶-1(TPS1)基因编码的海藻糖-6-磷酸合成酶是合成途径的关键酶。研究以荷花为实验材料，通过克隆测序获得一条2805 bp长度的荷花TPS1序列，编码934个氨基酸的蛋白质；其分子量为105kDa,等电点为6.93。论文构建了酵母TPS突变体，以通过回补实验验证NnTPS1的功能。以载体PGBKT7为模板，两端分别带有NnTPS1同源臂的TrP标签引物进行PCR扩增，通过在含有荷花TPS1基因编码区两边设计酶切位点的方式扩增编码区序列。分别取pDR196和TPS1基因编码区片段进行酶切，酶切产物经凝胶电泳，回收片段，将回收的TPS片段克隆到线性化的载体pDR196上，测定为正确即为pDR-TPS1。进行酵母突变体构建与功能互补实验证明了TPS1基因具有可以编码海藻糖-6-磷酸合成酶的功能。本文结果为进一步研究TPS1在荷花中的功能奠定基础。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1 材料与方法 4
1.1 实验材料 4
1.2 实验方法 4
1.2.1 荷花NnTPS1基因克隆4
1.2.2 高保真PCR扩增体系4
1.2.3 PCR产物回收5
1.2.4 克隆载体连接5
1.2.5 测序5
1.2.6 NnTPS1酵母互补试验5
2 结果与分析7
2.1 生物信息学分析7
2.2酵母互补实验7
2.2.1酵母突变体的构建7
2.2.2基因突变体的构建8
2.2.3酵母互补实验8
3 讨论9
致谢10
参考文献11
海藻糖6磷酸合酶1基因克隆及功能验证

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