摘要：为防止进境油菜籽中茎基溃疡病菌扩散，利用除草剂和杀菌剂直接阻断其扩散过程是最有效的措施。本文测定了10种除草剂对油菜幼苗的防除作用，筛选出5种药效较好的药剂；测定了7种常用杀菌剂对其作用的EC50，获得了4种抑菌作用较好的杀菌剂；利用荧光定量PCR技术，以已知菌量的油菜茎基溃疡病菌cDNA为模板，建立了从病样检测活菌数量的实时定量PCR检测技术。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 供试油菜籽和药剂2
1.2 杀菌剂和除草剂筛选2
1.2.1 除草剂筛选2
1.2.2 杀菌剂筛选2
1.3 建立油菜发病部位或者油菜籽活菌菌量检测的高通量检测技术2
1.3.1 cDNA的获取和引物的设计2
1.3.2 引物设计3
1.3.3 发病部位活菌菌量的测定3
2 结果与分析3
2.1 除草剂的筛选3
2.2 杀菌剂的毒力测定6
2.3 病样活菌量测定6
3 讨论8
致谢8
参考文献9
杀菌剂和除草剂在切断进境油菜茎基溃疡病菌扩散中的作用及油菜茎基溃疡病菌活菌量检测技术
引言
引言：油菜茎基溃疡病(phoma stem canker)是油菜上最严重的真菌病害之一,其致病菌为小球腔菌属的油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans。油菜茎基溃疡病菌L. maculans致病力强, 主要为害油菜与其他十字花科作物，在油菜茎叶形成灰色斑点，茎基部形成凹陷的溃疡斑，种子带菌。2007年被列为我国对外公布的进境植物检疫性有害生物，该病原菌在欧洲、澳大利亚和北美地区广泛分布,但在我国还未见报道,属于我国进境植物检疫性有害生物。近年来,我国出入境检验检疫机构从澳大利亚、加拿大和美国等国家进口油菜籽中多次截获茎基溃疡病菌[14]。
我国每年进口大量油菜籽，用于榨油等。根据国家质量监督检验检疫总局发布的《关于进口油菜籽实施紧急检疫措施的公告》，2013年1
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～12月份，我国油菜籽进口总量360万吨；预测2014年我国进口油菜籽将达到400万吨；进口油菜籽严禁做种；进口商和加工企业应采取有效的防疫措施，防止油菜籽及植物残体在接卸、运输等过程中撒漏。大量进口的油菜籽在解决我国本土油菜籽产量不足的同时，也为检疫性病害的引入和传播增加了潜在风险[13]。
目前，该病原菌的进境检疫研究相对滞后，缺少撒漏油菜籽及病残体可快速、准确的处理技术、检疫处理后的效果评价技术。为此，受江苏省动植物进出境检疫局的委托进行该方面的研究。对于进境撒、漏的油菜籽处理一直是个难题，人工捡拾费时费力；操作性差。因此，简捷方法之一是采用化学防治，利用杀菌剂和除草剂处理撒漏油菜籽和自生苗，从病原菌和寄主同时防控，阻止其扩散和传播。以油菜茎基溃疡病菌为模板，利用SYBRGreen荧光定量RTPCR检测技术，用于检测发病部位或者油菜籽活菌菌量。
1 材料与方法
1．1 供试油菜籽和药剂
本实验使用进境加拿大油菜籽，播种于覆土0.5cm深的玻璃培养皿（直径100mm）中，每皿10粒，均匀分布。
Table 1 Herbicide used for selection of killing rape seedlings
表1 杀死油菜幼苗的除草剂的筛选
　除草剂种类
有效成分含量
推荐用量
剂型
甲基二磺隆
30g/L
2035ml/亩
油悬浮剂OF
烷基乙基磺酸盐
280g/L
60100ml/亩
可溶液剂SL
LFBYYS
20%
5070ml/亩
乳油EC
MCS
480g/L
937.51125g/hm2
水剂AS
莠去津
38%
13501500g/hm2
悬浮剂SE
YBL
75%
7501125g/hm2
可湿性粉剂WP
PCJ
40%
600900g/hm2
可湿性粉剂WP
噻吩磺隆
75%
22.537.5g/hm2
水分散粒剂WG
CCT
40%
2436g/hm2
水分散粒剂WG
苯磺隆
75%
13.522.5g/hm2
水分散粒剂WG
1．2 杀菌剂和除草剂筛选
1．2．1 除草剂筛选
播种于培养皿中的油菜籽，发芽并长至30天，开始喷药。使用表11中的10种除草剂（表1），每种除草剂按其田间推荐用量的0.5倍、1倍、2倍、3倍和空白对照分为5组，喷施于油菜幼苗上，每组3个重复，从喷药当天开始观察并记录油菜幼苗生长情况（图1），并做实验记录。
1．2．2 杀菌剂筛选
使用的6种杀菌剂为Fda、bmj、Ljj、Fbj、Mjz、Fxa 和Kmjz原药对L. maculans 和L. biglobosa 进行离体毒力测定。药剂浓度设置：0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8和1.6μg/mL； 培养基根据杀菌剂种类的不同，选择PSA或者AEA+SHAM（100μg/mL）；4次重复；采用菌落直径抑制法进行测定EC50值（即抑制菌落生长直径50%时的杀菌剂浓度）。
1．3 建立油菜发病部位或者油菜籽活菌菌量检测的高通量检测技术
1．3．1 cDNA的获取和引物的设计
模板cDNA获取 供试菌株菌丝在液体培养基YEPD中摇培3d，过滤收集摇培得到的菌丝，在液氮中磨碎，使用大连TIANGEN生物公司的总RNA提取试剂盒，提取RNA，反转得cDNA，作为模板cDNA。

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