植物在逆境下经常会遭受氧化胁迫。为了探究转popW基因烟草对氧化胁迫的耐受性，本实验对转基因烟草和非转基因烟草在氧化胁迫下的多项生理指标进行了测定和比较，并对转基因烟草耐氧化胁迫的机理进行了解析。结果显示，外源添加H2O2对转基因烟草幼苗生长的抑制小于非转基因烟草，在百草枯(methyl viologen, MV)诱导的氧化胁迫条件下，转基因烟草细胞受损伤的程度小于非转基因烟草，过氧化物酶（peroxidase, POD）、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)的活性及抗坏血酸（Ascorbic Acid, ASA）的含量显著高于非转基因烟草，氧化胁迫应答基因相关基因:抗坏血酸过氧化物酶基因(NtAPX)、过氧化氢酶基因（NtCAT1）、谷胱甘肽转移酶基因（NtGST）及铜锌超氧化物歧化酶基因(NtCu/Zn-SOD)的表达量也显著高于非转基因烟草。这些结果表明，在烟草中过表达popW基因增强了烟草对氧化胁迫的耐受性，popW基因在应答非生物胁迫中可能起到了重要的作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.2 方法 2
1.2.1转popW基因烟草幼苗对H2O2的耐受性测定2
1.2.2转popW基因烟草离体叶片对氧化胁迫耐受性测定2
1.2.3叶绿素的含量的测定2
1.2.4营养生长期的转popW基因烟草对氧化胁迫耐受性测定2
1.2.5 MDA含量的测定3
1.2.6细胞质膜相对透性（相对电导率）测定3
1.2.7 SOD活性测定：氮蓝四唑（NBT）法3
1.2.8 POD活性测定:愈创木酚法3
1.2.9 CAT活性测定：紫外吸收法4
1.2.10 ASA含量的测定4
1.2.11 检测基因表达情况5
1.2.12 数据分析6
2 结果分析6
2.1 H2O2对烟草幼苗生长影响的结果与分析6 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 

2.2 烟草离体叶片对氧化胁迫的耐受性测定的结果与分析7
2.3 营养生长期的转popW基因烟草对百草枯耐受性测定的结果与分析8
2.4 转基因烟草细胞膜受损伤的程度的结果与分析9
2.5 抗氧化酶活性和清除活性氧能力9
2.6 过表达popW基因提高了烟草氧化胁迫应答基因的表达10
3 讨论 11
致谢12
参考文献12
转popW基因烟草对氧化胁迫耐受性探究
引言
需氧生物的正常生命活动离不开氧，但氧的某些代谢产物（如H2O2 )对机体又有着有害的一面。如果生物体内积累过多的自由基和活性氧，其细胞膜及生物大分子将会遭到破坏。在正常情况下，植物体内的清除活性氧的酶系统和非酶系统具有清除活性氧的功能，使植物细胞内活性氧的产生和清除处于一种动态平衡状态，不会伤害细胞。但植物遭受逆境时，这个平衡被打破，导致活性氧积累，膜系统破坏，植物的生理生化紊乱。所以，植物是否具有良好的抗逆性与其清除活性氧的能力有关(Mittler, 2002)。
PopW蛋白是本实验室从青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum) ZJ3721中鉴定出的一个39.79 KDa的新harpin蛋白，它同以前报道的harpin类物质具有相同的性质：酸性，富含甘氨酸和丝氨酸, 缺少半胱氨酸，热稳定，对蛋白酶敏感，在非寄主植物上引起过敏反应(Wei et al.,1992)。PopW 能够诱导植物产生系统抗性，并且该抗性属于水杨酸介导的植物系统获得抗性(systemic acquired resistance, SAR )。为了更好地研究popW的功能，构建了转popW基因烟草，前期研究发现转popW基因增强烟草对烟草花叶病毒的抗性，同时能促进烟草生长、提高烟草对H2O2的耐受性。
为了探究转基因烟草对氧化胁迫的耐受性提高的机理，本实验以苗期及营养生长期的转基因烟草为材料，测定了H2O2胁迫对烟草生长的影响以及在MV(methyl viologen, MV)诱导的氧化胁迫下烟草的丙二醛(malon di aldehyde, MDA）含量、相对电导率以及活性氧清除酶过氧化物酶（peroxidase, POD）、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)的活性及抗坏血酸（ascorbic Acid, ASA）的含量，同时检测了活性氧清除相关基因抗坏血酸过氧化物酶基因(NtAPX)、过氧化氢酶基因（NtCAT1）、谷胱甘肽转移酶基因（NtGST）及铜锌超氧化物歧化酶基因(NtCu/ZnSOD)的表达量的表达情况。
结果表明，氧化胁迫下转基因烟草幼苗的生长受到的抑制较小、质膜受损伤的程度较低、抗氧化酶POD、SOD、CAT的活性及ASA的含量高于非转基因烟草。这些结果表明，转popW基因提高了烟草对氧化胁迫的耐受性。
1 材料与方法
1.1 材料
T3代popW转基因烟草与野生型及转空载体烟草。
1.2方法
1.2.1转popW基因烟草幼苗对H2O2的耐受性测定
将烟草种子表面消毒后平铺在MS培养基上，3 d后将露白的种子转移到含有0 mM、5 mM、10 mM H2O2的MS培养基中，培养12 d后测鲜重(Jami et al., 2008)。
1.2.2转popW基因烟草离体叶片对H2O2耐受性测定
取67叶期的T3代转基因与非转基因烟草相同叶位的叶片，用直径为1 cm的打孔器打孔，每个株系取10片（约0.2 g）叶盘分别放入含有0、100 mM、200 mM H2O2的培养皿和含有0 µM、2 µM、5 µM MV的培养皿中(Zhang et al., 2012)，光照培养48 h后测定各处理的叶绿素含量，每个处理重复三次。
1.2.3叶绿素的含量的测定
参照Hemavathi等测量叶绿素含量（Hemavathi et al., 2010)。取0.2 g(可视样品叶绿素含量高低而增减用量)叶片，置于25 ml刻度试管中，加80 %乙醇10 ml左右，加塞放入60～80 °C水浴中保温提取叶绿素（或常温下放在暗处浸提12～24 h），至叶片全部褪绿为止，冷却后，用80 %乙醇定容至刻度，此液即为叶绿素提取液。

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