：烟草秸秆中纤维素比例较高，而纤维素可以利用生物作用转化为能源物质。本研究试图筛选出能降解烟秸秆的高效菌株，运用微生物降解解决资源的浪费问题，促进烟-稻轮作区的环境保护与生态农业持续发展。由于细菌中Bacillus subtilis、B.brevis等芽孢杆菌作为秸秆降解菌具有生长速率快、可产生降解纤维素的胞外酶等优点，近年来也被广泛研究。本研究从皖南地区烟-稻轮作田土壤里筛选了一株烟草秸秆降解菌YC-2，通过对其进行形态观察、生理生化特征鉴定以及16S rDNA测序比对及进化分析，确定YC-2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），以YC-2为后续研究对象。本实验对YC-2（Bacillus subtilis）CMCase和FPase产酶条件和酶学性质进行研究，得出枯草芽孢杆菌YC-2的最适产酶碳源为CMC-Na，氮源为酵母膏，pH为6.5，温度35℃，装液量为60mL/250mL；酶学特性研究结果表明酶的最适反应温度为60℃，温度在15℃-60℃之间酶具有稳定性；最适反应pH为7.0，且pH在4.0-7.5范围内，酶的稳定性较好。Pb2+、Zn2+、Na+、Fe3+、Ni+对酶活性抑制较强，Ba2+、Cr+、Cu2+、Mn2+对酶活有一定的抑制作用，但表现不明显；Co2+、Fe2+、Mg2+、Ca2+、Ag+对酶活有不同程度的激活作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言3
1 烟草秸秆降解菌YC2的分离及鉴定4
1.1材料与方法4
1.1.1材料4
1.1.2研究方法5
1.2结果分析9
1.2.1降解菌株的初筛9
1.2.2降解菌株的复筛10
1.2.3降解菌株的鉴定11
1.3讨论12
1.3.1降解菌株的筛选12
1.3.2降解菌株的鉴定12
1.4本章小结13
2烟草秸秆降解菌YC2产酶条件及酶学特性的研究14
2.1材料与方法14
2.1.1材料14
2.1.2培养基14
2.1.3试剂与
 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
仪器14
2.1.4枯草芽孢杆菌YC2产酶条件的研究14
2.1.5枯草芽孢杆菌YC2酶学特性研究15
2.2结果分析16
2.2.1枯草芽孢杆菌YC2产酶条件的研究16
2.2.2枯草芽孢杆菌YC2酶学特性研究19
2.3讨论23
2.4本章小结23
全文总结24
致谢25
参考文献26
 烟草秸秆降解菌YC2的分离鉴定、产酶条件及酶学特性研究
引言
引言
农作物秸秆通常指水稻、大豆、高粱、油菜、棉花、甘蔗等农作物在收获种子后剩余的部分[1]，全世界每年秸秆产量可达到22亿多吨，但是大部分均未被利用。我国作为农业大国，每一年产生的农作物秸秆可超过6亿吨[2]。若将这些秸秆换算成煤可达3亿多吨，而换算成纤维素可超过2亿吨，可见，秸秆是自然界中相当丰富的资源。而目前秸秆主要运用于下面4个方面：①作为工业原料如造纸产业；②作为畜牧饲料；③秸秆还田，增加土壤肥力；④农村生活能源[3]。我国皖南地区普遍采用烟稻轮作的种植方式，期间残余了大量的烟秸秆，很多烟农并未对农田间的烟秸杆进行任何处理，而是任其在自然条件下腐烂分解，待土壤翻耕后直接种植下一茬作物。[4]由于烟草秸秆木质素含量相对来说较高且含有烟碱，会对多种微生物生长有抑制作用，因此微生物对烟秸秆的降解较普通农作物秸秆更为困难，即短期内秸秆不易降解。所以这种处理方式不仅会影响后面的耕作管理，还会增大农田的面源污染。有的烟农将秸秆当柴火烧，还有些烟农直接就地焚烧秸秆，烟雾弥漫，不仅危害人们的身心健康，也会影响陆地交通与飞行安全。目前针对农作物秸秆的降解研究较多，而对烟草秸秆的降解研究较少，因此在现有的基础上，建立高效合理的生物转化技术是解决我国目前巨大秸秆资源浪费问题的根本出路。本研究目的是试图筛选出烟草秸秆降解菌，解决烟秸秆资源的不合理利用问题，为烟稻轮作地区的环境保护与生态农业可持续发展提供重要的理论和实践基础。[5]
本实验主要研究内容如下：
1、烟草秸杆降解菌的分离筛选
① 烟草秸秆降解菌的分离
② 烟草秸秆降解菌的初筛
③ 烟草秸秆降解菌的复筛
2、烟草秸秆降解菌的鉴定及降解率的测定
3、烟草秸杆降解菌降解酶特性的研究
① 烟草秸杆降解菌产酶条件的优化
② 烟草秸杆降解菌降解酶特性研究
1 烟草秸秆降解菌YC2的分离及鉴定
微生物降解秸杆，是将高效有降解活性的微生物加入秸秆中，经过一段时间的发酵使其成为具有生物肥效的物质的过程。降解菌株的筛选是获得秸秆高效降解菌的最基础性工作，也是秸秆生物转还田的关键。国内外学者主要采用自然富集筛选、诱变处理筛选、基因工程等方法构建高效菌株和利用混合菌群菌筛选出高效降解菌群。在自然界中，很多微生物及昆虫在条件合适下都可以分解纤维素，目前报道过的能够产纤维素酶的微生物已超过200种，其中主要是细菌、真菌、放线菌。其中真菌分解纤维素的能力最强，细菌和放线菌相对较弱。细菌分解纤维素能力较弱是因为细菌只能产生葡聚糖内切酶，是一种胞内酶，不能释放到胞外，所以大多数细菌都不会对纤维素晶体具有降解作用，因此工业生产中很少利用细菌来发酵产酶。但芽孢杆菌属细菌较其他属细菌来说，具有易被遗传修饰的优势，从而可以获得期望酶活力，并能减少副产物的产量，在工农业生产中具有很大的应用潜力。
本研究以皖南地区烟稻轮作田的土壤为材料，分离出了一株能降解烟秸杆的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），其能降解烟草秸杆主要是由于葡聚糖内切酶起的作用。该菌株产酶活性虽然较高，但对秸秆的降解效果并不是太明显，若要应用到农业生产中，其酶学特性还需进一步研究。
1．1 材料与方法
1. 1. 1 材料
1.1.1.1 样品
土壤采自皖南地区烟稻轮作试验田，烟秸秆来自湖北省恩施烟草所。
1.1.1.2 主要培养基
（1）CMC－Na固体培养基：CMCNa 15g，酵母膏1g，NH4NO3 1g，MgSO47H2O 0.5g，KH2PO4 1g，琼脂 20g，蒸馏水1000mL，pH 自然。
（2）烟草粉末培养基：烟草粉末15g，NH4NO3 1g，酵母膏1g，MgSO47H2O 0.5g，KH2PO4 1g，蒸馏水1000mL，pH 自然，固体琼脂20g。
（3）产酶发酵培养基：NaCl 0.1g，MgSO47H20 0.5 g，KH2P04 1g，CaCl2 0.1g，K2HPO4 2g，NaNO3 2.5g，FeCl3 0.01g，CaCl2 0.1g，烟草秸秆粉20g，蒸馏水1000mL。

原文链接：http://www.jxszl.com/swgc/smkx/50895.html