本试验采用基质栽培的方法，选用‘长绿’苦瓜和‘津优35号’黄瓜为试验材料。幼苗长至两叶一心时采用劈接法进行嫁接。幼苗长至三叶一心时，进行四组处理自根常温（Cs-28℃），自根高温（Cs-42℃），异根常温（Mc-28℃），异根高温（Mc-42℃）。结果表明高温胁迫下，嫁接黄瓜幼苗的株高、茎粗、苗干鲜重都受到了不同程度的影响，但利用苦瓜嫁接黄瓜幼苗的生长指标优于黄瓜自嫁接。通过研究苦瓜嫁接黄瓜幼苗与黄瓜自嫁接幼苗之间的差异蛋白点发现，表现差异的蛋白点主要包括光合作用相关蛋白、能量代谢相关蛋白、防御响应相关蛋白。因而苦瓜嫁接黄瓜缓解高温胁迫主要是通过调控植物体内的光合作用、能量和代谢、防御响应的过程，减轻高温胁迫对黄瓜幼苗造成的损伤。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言 1
1 材料与方法2
1.1 植物材料与幼苗培养 2
1.2 试验处理 2
1.3 测定方法2
1.3.1 生长指标测定2
1.3.2 叶片蛋白质的提取2
1.3.3 双向凝胶电泳2
1.3.4 染色和图像处理分析2
1.3.5 蛋白点质谱鉴定和数据搜索3
2 结果分析 3
2.1 高温胁迫对嫁接黄瓜生长的影响3
2.2 高温胁迫对嫁接黄瓜蛋白质的影响3
2.2.1 差异蛋白对光合作用的影响4
2.2.2 差异蛋白对能量和代谢的影响7
2.2.3 差异蛋白对防御响应的影响8
2.2.4 差异蛋白对蛋白质和核酸合成的影响10
2.2.5 未知功能蛋白11
3 小结11
致谢12
参考文献12
图1 高温胁迫对嫁接黄瓜幼苗叶片蛋白质表达的影响3
表1 高温胁迫下嫁接黄瓜株高、茎粗、叶面积、干重、鲜重、壮苗指数的影响3
表2 差异蛋白中与光合作用相关的蛋白点4
表3 差异蛋白中与能量和代谢相关的蛋白点8
表4 差异蛋白中与防御响应相关的蛋白点9 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 

表5 差异蛋白中与蛋白质和核酸合成相关的蛋白点10
表6 未知功能蛋白11
高温胁迫对嫁接黄瓜生理生长影响
引言
高温胁迫给露地和设施蔬菜栽培带来了严重的影响。我国许多地区夏季以及春夏、夏秋之交时，不管是日光温室还是塑料大棚内，由于强光和高温的叠加效应，棚内温度急剧增长，即使利用通风降温系统，温室内的温度仍然很高，白天气温经常超过黄瓜开花坐果的适宜温度范围[1]，严重影响植株的正常生长。
高温胁迫导致植物细胞内的生理生化过程发生变化。造成严重的伤害，生理代谢失衡,光合速率降低,产生大量的自由基,引起早衰,持续高温还会导致产量下降[2]。植物生长阶段不同，所处的生长环境不同，导致蛋白质的表达发生变化，而这种表达的改变与蛋白质的功能紧密相连。从蛋白质组学的角度研究植物应对环境胁迫的响应，为进一步揭示植物响应胁迫机理开辟了新的途径，对抗逆境应答蛋白的鉴定、解析植物抗逆机制具有重要的意义。高温胁迫将直接引起植物蛋白质发生变性和凝聚。高温使得组成蛋白质的多肽链断裂，蛋白质的空间结构遭到破坏，降解为氨基酸。最初蛋白质分子的变性是可逆的，但在持续高温下，很快转变为不可逆的凝聚状态。
嫁接技术不仅可以克服连作障碍，可以提高植物的抗病性[3]、抗旱性、耐盐性[4]及改善根系的吸收功能[5]，进而达到早熟、增产的目的。因而被广泛应用于设施农业生产中。苦瓜的生长势旺盛，根系发达，吸水能力强，以苦瓜作为砧木嫁接黄瓜幼苗的长势旺盛，有研究表明：利用苦瓜作为砧木嫁接黄瓜，砧木和接穗之间有较好的亲和性[6]。
黄瓜在我国栽培历史已有2000多年。由于黄瓜口感清脆,具有丰富的营养价值,所以深受人民的喜爱，在我国各地均有栽培。近年来，我国黄瓜栽培面积不断增加，已成为设施产量最高的蔬菜之一。因此，如何缓解高温胁迫对黄瓜生产的影响是近年来研究黄瓜抗逆性生理研究的重要方向。以往的研究者研究黄瓜周年供应，在耐热性方面也着重于外源物质缓解高温胁迫对黄瓜生理生长的影响的研究[7][9] ，或者研究不同品种南瓜作砧木嫁接黄瓜对嫁接苗生理生长的影响[10]，用丝瓜作为砧木提高黄瓜抗病及高温胁迫的研究也有一部分[11]，但是用苦瓜嫁接黄瓜提高耐热性的研究很少。且高温胁迫下，研究嫁接黄瓜生理生长的影响较多，对蛋白质组学的研究较少。因此，在本研究中，我们利用嫁接技术缓解高温胁迫带来的不利影响，比较嫁接后植株在高温胁迫和常温环境下蛋白质差异，以研究高温胁迫下嫁接黄瓜生理学指标的变化，为黄瓜克服高温胁迫提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 植物材料与幼苗培养
选择天津科润农业科技股份有限公司提供的较为耐热的‘津优35号’黄瓜品种，以及广东省农科院蔬菜研究所培育的‘长绿苦瓜’。
选择颗粒饱满、整齐一致的种子进行浸种催芽。种子穴播育苗。砧木露出第一片真叶而接穗两片子叶展开时进行劈接法嫁接。嫁接后将嫁接苗放入嫁接棚中，嫁接苗初期应当处于高温、高湿、弱光的环境中；45d后适当掀开棚子四周的塑料布进行通风换气；大约一周后，伤口愈合，转入正常管理。
1．2 试验处理
嫁接苗长至三叶一心时，将自根嫁接苗和苦瓜嫁接黄瓜苗分别分为两组，一组放置到常温光照培养箱，设置温度28/18℃；另一组放置于高温光照培养箱中，温度42/32℃。
培养七天后，各组随机取三株进行试验，测量各组的生长指标和生理指标。
1. 3 测定方法
1. 3. 1 生长指标的测定 取样后用直尺测量嫁接幼苗株高；用游标卡尺测量嫁接苗子叶节处茎粗；用叶面积测量仪测量第四片叶子的叶面积；用电子天平测定整株苗的鲜重；将样品杀青、烘干至恒重后测定黄瓜幼苗干重。根据壮苗指数计算公式：壮苗指数=（茎粗/株高）*苗干重计算壮苗指数。
1. 3. 2 叶片蛋白质的提取 利用TCA丙酮沉淀法提取嫁接黄瓜幼苗第四片叶片全蛋白。
1. 3. 3 双向电泳 用G250法测蛋白含量，并用水化液稀释到既定的上样量。利用OFarrel等人1975年发明的方法，根据蛋白质等电点不同进行第一向等电聚焦(IEF)。根据Laemmli （1970）的方法按分子量的不同用SDSPAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。
1. 3. 4 染色和图像处理分析 产生的凝胶利用考马斯亮蓝（CBB）R250染色液染色成可见的蛋白质斑点，将染色后的2DE凝胶在Image Scanner（GE Healthcare）扫描仪上进行扫描，利用Imagemaster 2D Platinum5.0软件分析图像。比较重复提取的蛋白图谱和双向凝胶，确保蛋白点的可重现性。选择显著差异至少在1.5倍变化的蛋白质点。

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