神经系统疾病由于其复杂的发病机制，治疗手段缺乏，已经成为国内外研究热点。在神经系统中胶质细胞承担重要的生理作用，例如，少突胶质细胞能够协助髓鞘形成；星形胶质细胞可以清除损伤部位的髓磷脂与一些神经元碎片。但是，胶质细胞的分化和发育进程以及相关的调控机制仍有许多环节尚不清楚，有待进一步深入研究。本研究通过构建Pen-2f/f，Emx1IREScre条件性敲除小鼠模型解析了γ-分泌酶在神经前体细胞向胶质细胞分化过程中的作用。通过使用Western Blot和免疫组化方法，发现Pen-2f/f，Emx1IREScre条件性敲除小鼠大脑皮层中的Olig2、SOX10和GFAP阳性细胞增多，NeuN阳性细胞减少，可见γ-分泌酶促进神经前体细胞向神经元分化，而抑制其向胶质细胞分化。本研究有助于深入解析胶质细胞分化机制，可以为神经系统疾病的病理研究和治疗方案提供一定的理论基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 实验材料 2
1.1.1 供试小鼠 2
1.1.2 实验试剂 2
1.1.3 实验仪器 3
1.2 实验设计 3
1.2.1 提取P7小鼠的脑3
1.2.2 提取蛋白质3
1.2.3 Western Blot分析3
1.2.4 免疫组化分析3
1.2.5 Nissl染色4
1.2.6 Genotyping 4
1.3 实验结果观察与统计 4
1.3.1 Western Blot结果观察4
1.3.2免疫组化和Nissl染色结果观察和统计4
1.3.3 Genotyping结果统计 4
2结果与分析4
2.1 cko鼠和control鼠的外观和生理状态比较4
2.2 Pen2f/f，Emx1IREScre的cko鼠的Pen2敲除效率5
2.3 cko鼠和control鼠的大脑皮层形态的比较 5
2.4 γ分泌酶促进神经前体细胞向神经元分化 6 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 

2.5 γ分泌酶抑制神经前体细胞向胶质细胞分化 7
2.6 γ分泌酶对髓鞘形成的影响10
3讨论 11
致谢11
参考文献12
γ分泌酶在小鼠神经前体细胞向胶质细胞分化过程中的功能研究
引言
引言：神经系统疾病由于其复杂的发病机制和缺乏有效的治疗手段已经成为现社会中威胁人类健康的主要原因之一，至今仍然有许多神经系统疾病的发病机制等待着人类去探索和解决[1]。神经细胞是神经系统的组成成分，而许多神经系统疾病的产生往往伴随着神经细胞生理甚至病理上的变化，所以对神经细胞生长和发育的研究很有必要。
神经干细胞是神经系统中的一种干细胞，具有自我更新和分化为其他细胞的能力。神经干细胞有两种分裂方式，一种为对称分裂，即分裂为两个神经干细胞，来实现自我的增殖。另外一种为不对称分裂，分裂为两类细胞。其中一类为神经干细胞，来维持神经干细胞数量的稳定，另外一类则为神经祖细胞，祖细胞可以进一步分化为神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞。而神经干细胞和神经祖细胞又统称为神经前体细胞[2]。
胶质细胞是神经系统中除了神经元的另一大类细胞，主要分为大胶质细胞和小胶质细胞。其中，大胶质细胞又主要分为少突胶质细胞、星形胶质细胞和施万细胞。少突胶质细胞和施万细胞一样都是成鞘细胞，可以在轴突周围产生紧密的髓鞘。髓鞘具有保护轴突的重要作用。髓鞘结构和功能的紊乱可导致多种中枢神经系统先天性、自身免疫性疾病，例如，多发性硬化，其病理表现主要就是脱髓鞘和轴突脱失[3]。星形胶质细胞是胶质细胞中数量最多、用途最广的亚型[4]，具有多种重要的生理，例如，调节葡萄糖的代谢、摄取神经递质、帮助突触的发育和成熟以及在血脑屏障中发挥的作用，对维持神经元微环境的平衡具有重要意义。中风、阿尔兹海默症、帕金森综合征甚至是抑郁症都与星形胶质细胞有关。星形胶质细胞在这些疾病的早期会增强自己的生理功能，分泌大量的神经营养因子，清除胞外多余的毒性物质，对神经元起着保护作用。但是随着病情的加重，星形胶质细胞会释放一些神经活性物质来加剧氧化应激和炎症反应，对神经元产生严重的继发性损伤[5]。小胶质细胞类似于神经组织中的巨噬细胞，它可以吞噬有毒物质和细胞碎片，维持着脑组织的稳态过程。和星形胶质细胞一样，小胶质细胞也是一把双刃剑，一方面可以通过吞噬功能、生长因子分泌促进损伤的修复，另一方面也可以诱发神经炎症并加深免疫损伤[6]。
γ分泌酶是一种天冬氨酰蛋白酶，由PSEN、APH1、Pen2和NCT 核心亚基组成，PSEN有两种同源物（PSEN1、PSEN2），APH1又有多种亚型，可见，γ分泌酶是一种复杂的多亚基复合体[7]。迄今为止，已经鉴定出了90多种γ分泌酶的底物[7]，其中最著名的就是淀粉样前体蛋白（APP），APP突变可导致γ分泌酶无法识别，从而被γ分泌酶切割为有毒性的Aβ，导致了阿尔茨海默症 [8]。同时，γ分泌酶对于神经发育的作用也越来越得到了越来越广泛的关注。已有研究表明，PSEN1的敲除鼠表现出了各种组织的严重发育异常，包括神经元迁移障碍,抑制神经祖细胞分化为有丝分裂后神经元[9]。同样，NCT在少突胶质细胞中的条件性敲除（conditional knockout，cko）会导致小鼠伴有脱髓鞘的病理表现和精神分裂症，具有失控行为[10]。而Pen2已经证明可以通过Notch信号通路来调节端脑中顶端祖细胞和基底祖细胞这两种祖细胞之间的动态平衡，从而维持皮质发育中的神经干细胞数量的稳态[11]。然而，γ分泌酶对于神经前体细胞分化命运影响的相关作用仍然知之甚少，神经前体细胞可以分化成神经元、少突胶质细胞或星形胶质细胞中的任何一种，所以本研究准备构建Pen2f/f，Emx1IREScre的cko小鼠，通过Western Blot和免疫组化方法来研究分析γ分泌酶对于神经前体细胞分化过程的影响，并探讨对髓鞘形成的作用以及这其中潜在的分子机制。

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