不定根（adventitious roots，AR）可以扩大植物吸收养分的面积，起到增强固定和支持植物体的作用，因此研究不定根的发生是生物学的一个重要课题。植物不定根的发生受到多种信号分子的影响，包括近期发现的一种新型信号分子——甲烷（methane，CH4）。多胺（Polyamines）是一类小分子脂肪族化合物，在植物生长发育中发挥广泛的生物学功能，且有证据表明其可诱导一氧化氮系统。虽然多胺和甲烷都可以诱导植物不定根的发生，但其中的作用及相互联系尚不明了。本实验用“露丰”黄瓜为材料 ，研究多胺在CH4诱导的黄瓜不定根发生过程中的调控作用。实验结果表明，外源CH4和多胺均能对黄瓜不定根发生有十分显著的诱导作用，但是这种促进可以被多胺抑制剂依氟鸟氨酸盐酸（Eflornithine）抑制，表明多胺可能参与了CH4诱导的黄瓜不定根发生。同时，富甲烷水（methane-rich water，MRW）处理可以使黄瓜外植体的内源多胺含量显著升高。进一步说明了多胺参与CH4诱导的黄瓜不定根发生。我们还发现不定根发生中的重要标志基因CsDNAJ-1、CsCDPK5、CsCDPK1、CsCDC6、CsAUX22D-like和CsAUX22B-like的表达水平在MRW的处理下可以被显著提高。综上，我们的结果表明多胺通过调节DNAJ-1和CDPK1 / 5等基因的表达而介导CH4诱导的不定根形成。
目录
摘要1
Abstract1
词汇缩略表.................................................................................................................................2
引言.....3
1材料与方法.......5
1.1 材料培养........5
1.2 富甲烷水溶液制备....................5
1.3 化学试剂............5
1.4 黄瓜外植体处理方法....5
1.5 黄瓜总RNA提取..5
1.6 根部cDNA的合成.................... *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
....................................................................................6
1.7 引物的设计................................................................................................................6
1.8 实时定量RTPCR分析.....7
1.9 内源性多胺的提取及含量测定....8
1.10 统计分析......8
2 结果与分析.9
2.1 多胺诱导黄瓜不定根发生具有浓度依赖效应....9
2.2 甲烷诱导内源多胺的产生......11
2.3 甲烷、多胺与抑制剂的组合处理...11
2.4 多胺影响不定根发生有关基因表达水平..... 12
3 讨论...14
致谢...14
参考文献...15
多胺在甲烷诱导的不定根发生过程中的调控作用
引言
词汇缩略表
AR
adventitious roots
不定根
cDNA
complementary DNA
互补DNA
CDPK
calciumdependent protein kinase
钙依赖蛋白激酶
cGMP
cyclic guanosine monophosphate
环磷酸鸟苷
CH4
methane
甲烷
CHCl3
trichloromethane
三氯甲烷
CO
carbon monoxide
一氧化碳
H2
hydrogen
氢气
H2S
hydrogen sulfide
硫化氢
HClO4
perchloric acid
高氯酸
HO1
heme oxygenase 1
血红素加氧酶1
IAA
auxin
生长素
IPA
isopropanol
异丙醇
MRW
methanerich water
富甲烷水
NaCl
sodium chloride
氯化钠
NaClO
sdium hypochlorite
次氯酸钠
NaOH
sodium hydroxide
氢氧化钠
NO
nitric oxide
一氧化氮
NPA
1Nnaphthylphthalamic acid
1N萘基邻氨甲酰苯甲酸
ODC
ornithine decarboxylase
鸟胺酸去羧化酶
PBS
phosphate buffer saline
磷酸缓冲盐溶液
PBS
Phosphate Buffered Saline
磷酸盐缓冲溶液
qRTPCR
Realtime Quantitative polymerase chain reaction
实时荧光定量PCR
RNA
ribonucleic acid
核糖核酸
Spd
spermidine
亚精胺
Spm
spmermin
精胺
引言
在高等植物中，根系不但具有吸收水分和矿质营养的功能，同时还具有支撑和固定植物体的作用[1]。主根、侧根、不定根和根毛构成了植物的根系。发生在茎或叶上的根叫做不定根，发生部位具有不确定性[2]。用外植体研究不定根的发生，对于研究不定根发生原因和规律有不可或缺的作用[3]。
目前许多研究也已经证实植物自身能释放CH4[4]。植物自身释放CH4与环境胁迫有关[5]。物理性损伤和缺氧也能刺激植物产生CH4[6]。但是对CH4在植物体内产生的具体生物学功能却并不清晰。最近有人发现，CH4是一种新的动物气体信号分子，CH4能否也可调控黄瓜不定根的产生值得更深一步研究。

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