目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法3
1.1 材料 3
1.2 方法 3
1.2.1 分离筛选3
1.2.2 特异PCR3
1.2.3 琼脂糖凝胶电泳3
1.2.4 SDSPAGE电泳4
1.2.5 生长曲线测定4
1.2.6 电转化5
1.2.7 甲基对硫磷水解酶(MPH)酶活测定5
2 结果与分析5
2.1 筛菌结果5
2.2 质粒转化11
2.3 发酵条件优化13
3 讨论13
3.1 D4菌株电转效率13
3.2 D4菌株基因敲除14
3.3 发酵培养基14
致谢14
参考文献15
附录116
附录217
附录319
地衣芽孢杆菌的分离及其表达系统的建立
摘 要
地衣芽孢杆菌是一种在土壤中常见的革兰氏阳性菌，能够产生强抗逆性内生芽孢，生存力强，培养条件较简单。其酶系丰富、产酶量高、细胞壁组成成分相对简单、异源蛋白表达水平高，具备成为良好的异源蛋白表达宿主的潜力。通过对细菌的菌落形态、生理生化和分子生物学特性分析对菌株进行初步筛选，扩增comK、spo0A基因，凭此序列构建进化发育树以鉴定芽孢杆菌。最终得到易于进行遗传操作和能够高效表达目的基因的菌株作为表达宿主，导入外源基因以提高基因产物的产量。本实验筛选得到七株长势良好的地衣芽孢杆菌，其中仅D4菌株能够成功转化，转化效率稳定在200 CFU/µg DNA。将pP43NMK质粒导入D4菌株，并且功能性表达MPH。

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