棉花在我国国民经济中起着十分重要的作用，但很多生物、非生物胁迫会大幅影响棉花产量，其中影响最大的是由大丽轮枝菌引起的黄萎病。就目前而言，缓解棉花黄萎病危害的根本措施是培育出抗病的棉花新品种。通过病毒诱导的基因沉默（VIGS，virus-induced gene silencing）方法将目的基因定向沉默，从而观察其在棉花抗黄萎病中的作用是一种高效快捷的筛选方法。本实验通过构建烟草脆裂病毒（TRV）诱导的基因沉默体系，定向沉默了棉花nodulin基因家族的部分基因，在大丽轮枝菌侵染沉默棉花后统计发病率，发现基因Gh_D05G2226、Gh_A13G0025、Gh_A03G1239、Gh_D04G0498被沉默后，对应棉花的发病率与对照组相比显著降低，从而筛选出以上4个黄萎病感病基因，为培育棉花抗病品种提供理论基础及候选基因资源。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1 材料与方法4
1.1实验材料4
1.2实验方法4
1.2.1 nodulin基因家族的克隆4
1.2.2克隆载体pMD19Tnodulin的构建6
1.2.3 TRV2nodulin沉默载体的构建6
1.2.4 农杆菌介导基因沉默7
1.2.5大丽轮枝菌侵染棉花7
2 结果与分析8
2.1 TRV2nodulin沉默载体的构建8
2.2 TRVVIGS方法沉默对应基因对棉花抗/感黄萎病的影响9
3讨论11
3.1病毒诱导的基因沉默11
3.2影响VIGS沉默效率的因素12
3.3棉花nodulin基因家族的功能12
致谢12
参考文献13
棉花nodulin基因家族在棉花抗/感黄萎病中的功能研究
国家生命科学与技术人才培养基地141 孙睿铭
引言
棉花（Gossypimu spp.）是我国非常重要的经济作物，同时也可以作为原料加工成纤维、棉籽油、生物燃料等产品。各种极端条件例如高温、干旱等对棉 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
花的整个生产过程有很大的影响，同时各类病虫害也会导致棉花产量与品质的下降。黄萎病（Verticillium wilt）作为目前影响棉花产量的最主要因素，有着侵染植株后引起叶片变黄，皱缩甚至引起植株死亡的特性, 大幅降低棉花产量及纤维品质。二十世纪初期我国从美国引种棉花，导致黄萎病传入中国，如今该病已蔓延至全国各地。大丽轮枝菌是主要的黄萎病菌。
缓解棉花黄萎病危害的根本措施是培育出抗病的棉花新品种。目前大多数棉花品种没有较强的抗黄萎病能力，而传统方式培育棉花抗病植株周期太长。由于黄萎病菌的致病机制研究还不成熟，所以在分子水平上揭示大丽轮枝菌对棉花的作用,从而筛选出棉花黄萎病的相关抗性基因,对培育抗病棉花新材料有着重大的意义。
病毒诱导的基因沉默以其高效，获得表型快，操作简便价格低廉等优势成为目前应用在棉花功能基因组研究中最常见的一种方法。其中由烟草脆裂病毒诱导的基因沉默有着植物各组织均可沉默，沉默时间长，植物病症较轻等优点。王心宇等已成功在棉花中建立了TRVVIGS体系并应用于黄萎病的研究。
根据转录组研究发现，在大丽轮枝菌侵染棉花后，很多nodulin基因家族成员的表达发生明显变化。本实验利用NCBI基因库中的棉花基因序列设计引物，克隆了Gh_D05G2226、Gh_A13G0025、Gh_A03G1239、Gh_A05G3136、Gh_D04G0498、Gh_D05G2223这些nodulin家族的基因，并成功构建了对应的TRVnodulin沉默载体。利用TRVVIGS技术在陆地棉TM1中分别沉默了对应基因，在大丽轮枝菌侵染沉默棉花后统计黄萎病的发病率，最终发现基因Gh_D05G2226、Gh_A13G0025、Gh_A03G1239、Gh_D04G0498被沉默后，对应棉花的黄萎病发病率与对照组相比显著降低，从而筛选出以上4个黄萎病感病基因，为接下来培育棉花抗病品种提供理论基础及候选基因资源。
1 材料与方法
1．1 实验材料

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