金黄色葡萄球菌和沙门氏菌是影响公众健康的主要食源性致病菌，在食品生产加工过程中容易形成生物菌膜，引起严重的危害，因此作为本研究的试验对象。酸性电解水和臭氧水是两种新型消毒剂，已被广泛应用于食品工业中的消毒杀菌，与此同时，超声波作为一种辅助杀菌技术引起了人们的广泛关注。考虑到单一杀菌方法效果有限，本文以酸性电解水和臭氧水为主要杀菌方式，结合超声波处理，探究联合处理对生物菌膜的清除效果。平板计数结果发现酸性电解水联合超声波的清除效果最佳，对两种生物菌膜的致死率超过99.9%。对致死曲线进行模型拟合，发现金黄色葡萄球菌生物菌膜致死曲线与Weibull模型拟合较好，而沙门氏菌生物菌膜致死曲线更适合采用Linear模型。该研究表明，使用酸性电解水联合超声波处理生物菌膜具有良好的杀菌效果，可用于确保食品工业的安全性。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1材料与设备 4
1.1.1菌种4
1.1.2培养基和试剂4
1.1.3仪器设备4
1.2试验方法 4
1.2.1电解水制备和臭氧水制备4
1.2.2生物菌膜的制备5
1.2.3灭菌处理和平板计数5
1.2.4致死曲线的测定5
1.2.5 灭活模型和统计分析5
2结果与分析6
2.1 不同杀菌组合对生物菌膜清除的效果分析6
2.2 致死曲线和动力学模型7
2.2.1 生物菌膜的致死曲线8
2.2.2 动力学方程和模型分析8
3讨论10
致谢11
参考文献11
金黄色葡萄球菌和沙门氏菌生物菌膜清除技术研究
引言
生物菌膜指的是细菌嵌入自身产生的细胞外聚合物内形成的多细胞三维结构群体，大多粘附于活体组织或固体表面。细菌能够在食品加工设备表面形成生物菌膜。这会对输送管路和加工器械等造成表面损伤，更是一种威胁人体健康的潜在污染源，导致食品腐败和疾病传播，严重威胁食品安全[1]。约65%人类细菌性感染 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
是由生物菌膜引起[2]。相关食品安全事件带来的经济利益损失是巨大的。沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和李斯特菌 [35]等具备粘附到加工器具表面形成生物菌膜的能力。目前生物菌膜已成为食品工业的重大挑战，乳品厂[6]、肉类和家禽加工[7]、餐饮企业[8]以及发酵饮料厂[9]均受到影响。
沙门氏菌（Salmonella）属于革兰氏阴性直杆菌，是全球范围内影响公众健康的主要致病菌。在欧洲和美国，沙门氏菌位于食源性细菌食物中毒致病因子的第1位，每年会引起十几万人食物中毒[10]。沙门氏菌在肉、奶、蛋及其制品中比较常见，容易引发人的感染而引起腹泻等不良症状[11]。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）属于革兰氏阳性菌。它具有极强的生存能力，严重危害人体健康。它可以产生肠毒素而引发食物中毒，中毒者多表现出恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状[12]。沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均具有极强的产生生物菌膜的能力，因此加强对生物菌膜的控制是保障食品安全的重要手段。
目前，食源性致病菌生物菌膜控制的常规方法是化学消毒法，并且越来越向高效环保的方向发展。臭氧是一种有效的抗菌剂，具有高效广谱杀菌性，并且使用后无残留，效率高，成本低。与臭氧气体相比，臭氧在水中可产生OH和OOH等具有强氧化性的含氧基，具有更强的氧化性和杀菌消毒能力[13]。酸性电解水（AEW）是一种新型杀菌技术。它具有强效、速效、持续、环保、广谱的杀菌特点，对食品色泽和风味影响小，且制造成本低、使用方便。与其他化学杀菌剂相比，AEW使用后无残留，不会产生环境污染物[14]。超声波处理是一种非热灭菌技术，具有速度快，无外来添加物污染，对人体无伤害，对食品中的热敏性成分无损伤的特点[15]。在食品工业中，超声波通常作为一种辅助杀菌方法，与其他方法联合使用。
近年来，关于超声波和消毒剂如氯、臭氧和过氧化氢联合使用的研究内容较多。但已有实验数据中电解水联合超声波和臭氧水联合超声波来清除食源性致病菌生物菌膜的相关研究内容有限。本文以金黄色葡萄球菌生物菌膜和沙门氏菌生物菌膜为试验对象，酸性电解水和臭氧水为杀菌方法，联合超声波处理，选择杀菌效果最好的方法测定致死曲线，采用Weibull模型和Linear模型进行拟合。本研究将提供环保高效灭菌技术，旨在提高灭菌效率，增加经济效益。
1 材料与方法
1．1 材料与设备
1．1．1 菌种
五株沙门氏菌的菌株编号为6、27、44、61、70。五株金黄色葡萄球菌的菌株编号为100、101、102、103、104。菌株由大学国家肉品质量安全控制工程技术研究中心提供。
1．1．2 培养基和试剂
胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）购于青岛高科技工业园海博生物技术有限公司；胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）购于北京陆桥技术股份有限公司；五水合硫代硫酸钠购于南京化学试剂股份有限公司；氯化钠购于西陇科学股份有限公司。
1．1．3 仪器设备
KQ300DE数控超声波清洗器
昆山市超声仪器有限公司
GCSJ1517电解式高浓度臭氧水机
武汉威蒙环保科技有限公司
CE71008酸性氧化电解水生成器
山东康辉水处理设备有限公司
Scan1200自动影像分析菌落计数仪
法国interscience公司
BIO Ⅱ Adcance4 Sterile GARD生物安全柜
西班牙Telstar公司
JumboMix3500拍击式均质器
法国interscience公司
SPX250BZ生化培养箱
上海博讯实业有限医疗设备厂
1．2 试验方法
1．2．1 电解水制备和臭氧水制备
使用酸性电解水生成器生产pH为2.66，氧化还原电位为1076 mV，有效氯浓度为30 mg/L的酸性电解水。

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