正红菇多糖的提取及其抗氧化活性的研究
摘要
以福建正红菇为原料，利用酶法提取正红菇多糖，通过单因素试验考察酶质量分数、酶处理温度、酶处理时间及酶液pH值等四个因素对正红菇粗多糖的率的影响。得到一组最佳条件后，使用响应面软件对结果进行进一步分析，得到最优反应条件。结果显示，正红菇粗多糖的最佳提取条件为酶质量分数35.94%、酶处理温度54.17℃、酶处理时间2.48h酶液pH值6.82，粗多糖得率为6.23%。用活性炭对粗多糖进行脱色处理，用Sevag法对粗多糖除蛋白处理，将获取的正红菇多糖的进行抗氧化活性测定。实验证明，在0.1%～0.5%的浓度范围内，红菇多糖溶液对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力随着浓度的增加而增强，证明其具有较好的抗氧化活性。
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关键字:正红菇多糖提取抗氧化活性
目录
1.前言 1
1.1正红菇研究现状 1
1.1.1红菇简介 1
1.1.2红菇营养成分及功效 1
1.2食用菌多糖的研究现状 1
1.2.1多糖概述 1
1.2.2食用菌多糖的生理活性 2
1.2.3多糖的提取方法 3
1.2.4红菇粗多糖的初步提纯 4
1.3研究目的、意义及内容 5
1.3.1研究目的、意义 5
1.3.2研究内容 5
2.材料与方法 6
2.1实验仪器与材料 6
2.1.1实验材料 6
2.1.2实验仪器 6
2.2实验方法 6
2.2.1多糖提取单因素实验 7
2.2.2响应面分析 7
2.2.3多糖纯化 7
2.2.4苯酚硫酸法测多糖含量 8
2.2.5红菇多糖抗氧化活性初探 9
3.结果与分析 9
3.1单因素试验的结果分析 9
3.1.1酶解时间对多糖得率的影响 9
3.1.2酶液处理温度对多糖得率的影响 10
3.1.3酶质量分数对多糖得率的影响 10
3.1.4 酶液pH值对多糖得率的影响 11
3.2响应面优化提取条件 11
3.2.1响应面分析结果 11
3.2.2单因素交互作用及响应面优化分析 14
3.2.3验证实验 18
3.3红菇多糖抗氧化活性结果分析 18
3.3.1清除羟基自由基的能力 18
3.3.2清除超氧阴离子自由基的能力 19
4.结论 22
参考文献 23
致谢 25
1.前言
1.1正红菇研究现状
1.1.1红菇简介
红菇又名正红菇、真红菇、大红菇等，是一类大型根真菌，属伞菌目红菇科。多产于我国福建、广西、四川、贵州、云南等地，尤以福建的红菇最为著名。
1.1.2红菇营养成分及功效
红菇含有丰富的碳水化合物、蛋白质、氨基酸、维生素B、维生素D、维生素E和众多人体必须的微量元素，并且含有其他食品非常稀少的尼克酸，是一种极具营养保健价值的天然食品。研究发现[1]，红菇有抗癌、降血糖、降血脂、抗菌、提高免疫力、延缓机体衰老的功效。
红菇野生数量有限，而且尚未找到有效的人工栽培方法，所以研究菌丝体的生产已成为目前的研究热门。研究发现[1]，红菇菌丝体和子实体具有丰富的营养物质，民间多用红菇治疗妇女产后贫血，且实验也证明红菇的热水浸提液能够有效治疗小鼠失血性贫血，但补血机理尚不清楚。
经研究表明[1]，红菇中的一些主要成分具有清热解毒、平喘、祛痰等功效。并且红菇中的脑苷脂类物质具有抗病毒、抗肿瘤，提高免疫力等作用，证明红菇具有不错的药用价值,红菇含有多糖类抗癌物质，能够降低血液胆固醇含量、阻止癌细胞扩散，促进血液循环。
1.2食用菌多糖的研究现状
1.2.1多糖概述
多糖是由糖苷键结合的糖链。由相同的单糖组成的多糖称为同多糖，如淀粉和糖原；以不同的单糖组成的多糖称为杂多糖，如阿拉伯胶（戊糖和半乳糖）。多糖不是一种纯粹的化学物质，而是由聚合程度不同的物质组成的混合物。多糖类一般不溶于水，无甜味，不能形成结晶，无还原性。多糖也是糖苷，因此可以被水解，在水解过程中，产生一系列的中间产物，最终完全水解得到单糖[1] 。
多糖种类一般可分为五大类，（1）动物性多糖：主要来源于哺乳动物。（2）植物性多糖：主要来源于高等植物，如茶叶、枸杞、南瓜、枣类等中的多糖。（3）真菌类多糖：主要来源于我们所研究的菇类以及灵芝、木耳等。（4）藻类多糖：主要来源于海带、紫菜、红藻等。（5）细菌类多糖：多来源于菌类中的荚膜多糖[2]。
研究证明[2]，食用菌多糖具有巨大的医用、药用价值。具有提高人体免疫、抗癌抗肿瘤、抗衰老、降血糖、降血脂等作用。除此之外，还有镇痛、镇静、化痰止咳等功效。
1.2.2食用菌多糖的生理活性
人们最早从20世纪50年代开始从事食用菌多糖的研究，因为它的无毒。无副作用，所以现在在食品、医药、生物等领域收到了很大的重视和研究。研究已经表明使用菌多糖具有抗肿瘤、抗菌、抗氧化等等功能。
(1)增强免疫调节
国内外大量研究证明[2]，真菌多糖大多具有增强免疫功能的作用，如灵芝、木耳、平菇、冬虫夏草的多糖等。
田庚元[3] 等人研究认为，多糖能提高巨噬细胞的吞噬能力，可抑制实体瘤的生长。1988年夏尔宁[4] 发现银耳多糖能增强小白鼠巨噬细胞的吞噬能力，从而促进小白鼠的免疫系统免疫能力。另外，香菇多糖能够增加小白鼠脾脏重量，提高抗体生成量，从而增强体液免疫；人参多糖、猴头菇多糖等能够提高巨噬细胞的吞噬能力，提高免疫能力[5] 。
(2)抗肿瘤、抗癌作用
多糖的抗癌抗肿瘤主要通过增强宿主免疫系统的免疫能力来抑制肿瘤和癌变的发生，能够强化正常细胞，提高抵抗能力；另外是对肿瘤起到杀伤作用从而起到治疗的效果。
1969年千原[6-7] 等从香菇中分理处的多糖对抑制了肿瘤S-180的小白鼠进行实验，，发现对肿瘤的抑制作用非常明显。董海滨[7] 等研究了平菇多糖对肿瘤细胞及人胚肾细胞的抑制效果，表明了对肿瘤细胞具有较好的杀伤力，而对人胚肾细胞基本没有杀伤力，而一般化学抗癌药物氟尿嘧啶却对人胚肾细胞同样有杀伤力，体现出了多糖的无毒无副作用的优势。
(3)抗衰老作用
自由基，又称“游离基”，指化合物的分子在光热等外界条件作用下，共价键发生均裂而产生的具有不成对电子的原子或基团。自由基学说中认为人体组织老化的原因是由于体内过多的自由基[22-23] 。
孙文娟[9-10]等用北五味子中提取的多糖对小鼠进行灌胃3-7天，来研究小数存活时间、连续游泳时间、免疫器官重量。大鼠连续灌胃20天，研究LPO和SOD活性。研究[9]发现北五味子多糖能够提高小白鼠的抗疲劳能力，增加免疫器官重量，提高SOD的活性，相反的可降低LPO的含量。Xuebiao peng[10] 通过实验研究木耳多糖对小鼠皮肤的氧化作用的影响，发现木耳多糖能够明显提高SOD的活性，可延缓皮肤衰老。说明多糖具有明显的抗衰老作用。
(4)降血糖、降血脂作用
研究发现[11]，食用菌多糖具有降低血糖水平，降低血液中胆固醇的含量和抗凝血、抗动脉粥样硬化等作用。
姜秀莲[11] 研究发现，银耳多糖能够显著降低患四氧嘧啶糖尿病小白鼠的血糖水平，说明银耳多糖能够在一定程度上治疗四氧嘧啶糖尿病。据报道[12] ，浒苔多糖能够降低小白鼠的血清胆固醇；南瓜多糖对小白鼠腹腔注射后能够降低TG，LDL；Kaneda和Tokuda[13] 研究发现香菇多糖能够降低血液中胆固醇的含量。说明多糖对降血糖、降血脂有一定的疗效。
1.2.3多糖的提取方法
（1）热水浸提法
热水浸提法师较为普遍的一种多糖提取的方法，主要是通过高温使细胞质壁分离，从而提取多糖。该法用水作为溶剂，通过恒温水浴锅浸提，过滤得到滤液，并用滤渣重复操作多次，然后经过浓缩、沉淀、离心、干燥等操作得到粗多糖[14]。
原文链接：http://www.jxszl.com/swgc/spzlyaq/5981.html
