仔猪肠道益生菌的分离与鉴定本项目针对抗生素应用的弊端和微生物制剂应用中存在的问题，尝试从仔猪肠道内分离益生菌。通过对仔猪的大、小肠中微生物的分离，联合细菌的形态学特征，生理生化指标，及16 S rRNA基因序列检验方法对其进行鉴定，共筛选出10株菌，其中有5株乳酸菌和5株芽孢杆菌，乳酸菌包括包括R5肠膜明串珠1株，发酵乳酸杆菌4株；芽孢杆菌包括Y3栗褐芽孢杆菌1株，枯草芽孢杆菌4株。猪肠源益生菌的分离与鉴定，可以为畜禽益生菌制剂的开发奠定基础。关键词仔猪；乳酸菌；芽袍杆菌；分离鉴定
目录
1 益生菌概述 1
1.1 乳酸菌 1
1.1.1 乳酸菌的定义 1
1.1.2 乳酸菌的一般特性 1
1.1.3 乳酸菌的作用机理 2
1.2 芽孢杆菌 3
1.2.1 芽孢杆菌的定义 3
1.2.2 芽孢杆菌的一般特征 3
1.2.3 芽孢杆菌的作用机理 3
1.3 研究的目的和意义 6
1.3.1研究目的 6
1.3.2研究意义 6
2 材料及方法 7
2.1 实验原料 7
2.2 实验试剂 7
2.3 仪器设备 7
2.4 实验准备 7
3 细菌分离 7
3.1 样品的采集 7
3.2 乳酸菌的分离 7
3.3 芽孢杆菌的分离 8
4 细菌鉴定 8
4.1 菌体形态学检查 8
4.2 生理生化实验 8
4.2.1 接触酶试验 9
4.2.2 淀粉水解试验 9
4.2.3 明胶液化试验 9
4.2.4 葡萄糖氧化发酵产气试验 9
4.3 16 S rDNA序列分析 10
4.3.1 DNA抽提 10
4.3.2 PCR扩增 11
4.3.3 电泳检测 11
5 结果分析 12
5.1 细菌的筛选 12
5.1.1 乳酸菌的筛选 12
5.2 菌体形态 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
学检查 12
5.2.1 乳酸菌的个体形态和菌落特征 12
5.2.2 芽孢杆菌的个体形态和菌落特征 14
5.3 生理生化鉴定 15
5.3.1 乳酸菌生理生化鉴定 15
5.3.2 芽孢杆菌菌生理生化鉴定 16
5.4 16 S rDNA序列分析 17
5.5 系统进化树 17
讨论 22
致谢 23
参考文献 24
附录 27
1 益生菌概述
益生菌也被翻译为“益生菌，活菌剂或原生菌”。益生菌一词起源于希腊语，1965年由Lilley和Stillwell首先定义为“由微生物提取的物质或组织，可刺激其余微生物的生长”[1]。从1965到2002经过这几十年的发展，益生菌已变得越来越复杂。益生菌的数量和健康益处也得到了进一步的丰富，具有益生菌功效的新菌株已被不断筛选和鉴定[24]。
益生菌制剂经过直接喂养动物，使有益的活体微生物在动物肠道产生作用，它克服了抗生素所造成的耐药菌株的增加以及药物的毒副作用，它还调节肠道菌群的稳定性，拮抗病原菌，阻碍一些肠道毒素的产生和吸收，并改善微生态平衡。可以在畜牧业生产中发挥重要作用，如提高饲料转化率，促进畜禽生长; 预防幼畜的疾病； 减少有害气体的排放，净化环境； 提高产品质量，实现无公害产品，节约饲料，降低资金投入，提高经济效益[5]。
1.1 乳酸菌
1.1.1 乳酸菌的定义
乳酸菌（LAB，Lactic acid bacteria）是指通过使用碳水化合物（主要是葡萄糖）使产出大量乳酸细菌的总称[6]，但不属于严格的系统分类。按此定义乳酸菌现在可划分为23个属[7]。乳酸菌有一些基本特征；它们是细胞染色的革兰氏阳性菌；他们有杆菌，短棒，球状和类球状；过氧化氢酶是阴性的；代谢产物以乳酸为唯一或主要产物，还有乳酸，琥珀酸，醋酸等的混合物；脂肪分解能力弱； 蛋白质的分解不会产生侵蚀产物；不形成孢子；不运动或很少运动。
1.1.2 乳酸菌的一般特性
1.1.2.1形态及染色
菌丝常被排列成链，菌体球状，通常成对或成链。乳酸杆菌群，单链或多链，有时丝状，产生假枝。大多数人不运动，有些人每周做毛发运动。无芽孢，革兰氏染色为阳性。
1.1.2.2培养
乳酸杆菌属适合在缺氧或厌氧环境中生长的兼性厌氧菌，适用于（95％）氮气培养+ 5％二氧化碳容器[8]，适宜的温度是3040，适宜的pH值是5.56.2。在温和的酸性环境中生长，生长速率在中性或碱性环境下降低。
1.1.2.3生化特征
乳酸菌具有特殊的生化特性[9]：它可以发酵糖产生乳酸（分为同型和异型乳酸发酵）、分解蛋白质和脂肪能力弱、乳酸菌接触酶阳性、适宜生长于微酸性环境、其生长培养基的pH可以低至5左右、耐酸较强。
1.1.3 乳酸菌的作用机理
1.1.3.1为宿主提供营养物质 
乳酸菌可产生维生素、氨基酸和矿物质等物质，还可分泌多种消化酶。这些代谢物在动物中具有营养作用。乳酸菌在肠内产生维生素B1，B3，B4，B6和B12，丙氨酸，缬氨酸，天冬氨酸和苏氨酸。乳酸菌可在动物的胃肠道产生乳酸，构成微酸性环境，提高营养物质的消化率。乳酸产生的乳酸可以抑制植酸对肠道磷和钙的络合作用，增强人体对磷和钙的吸收，增强蠕动，促进钙，铁，锌等的吸收[10]。
1.1.3.2促进宿主对营养物质的消化吸收 
乳酸菌可以产生一定量的消化酶来协助消化饲料。Lactobacillus、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus casei和Streptococcus faecalis的混合物能提高生长猪肠黏膜中碳水化合物分解酶的活性。嗜酸乳杆菌可提升小鼠小肠淀粉酶水平，但对蛋白质分解和脂解活性无影响。 

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