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高产葡聚糖酶芽孢杆菌的筛选(附件)

2021-05-26 20:40编辑: www.jxszl.com景先生毕设
β-葡聚糖酶是一种能够降解谷物中β葡聚糖的水解酶,主要存在于微生物、植物和一些低等植物等体内[1]。包括有内切和外切β-1,3-葡聚糖酶、β-(1,3-1,4)-葡聚糖酶、内切和外切β-1,4-葡聚糖酶。β-葡聚糖酶将长片段的β葡聚糖降解成为低分子量片段,可降低β-葡聚糖的粘度,破坏β-葡聚糖的空间结构等[2]。将β-葡聚糖酶添加到饲料中,能够提高牲畜的生长速率,提高收益;添加到啤酒酿造中,能够提高麦汁的提取率,从而提高啤酒酿造的效率。目前市场上,常见的葡聚糖酶主要都是由真菌和细菌发酵提取,而且绝大部分酶制剂都是由国外的酶制剂生产公司生产,价格昂贵,很大程度上制约了我国相关行业的发展,因此研究高产葡聚糖酶的菌株具有重大意义。芽孢杆菌具有无致病性、生长速度快和胞外蛋白分泌能力强等优点,因而成为酶制剂工业研究的热点[3]。本论文主要先通过琼脂扩散法对芽孢杆菌进行初步筛选,筛选出产酶的芽孢杆菌,然后再通过DNS法测定初步筛选出的芽孢杆菌酶液的酶活性,最后选出酶活性最高的芽孢杆菌菌株,测其基因序列确定是哪一种芽孢杆菌。主要研究结果如下1.采用琼脂扩散法初步筛选芽孢杆菌[4]首先通过离心收集芽孢杆菌菌株的无菌体清夜,配制初步筛选培养基,倒双层平板,将牛津杯放在双层平板上,吸取200μL无菌体清夜打到牛津杯中,放入恒温培养箱培养后观察水解圈。选取10株水解圈大的菌株进行下一步实验。2.通过DNS法[5]测定之前选取的10株菌株的酶活性配制DNS试剂、葡萄糖标准溶液,通过分光光度计测定不同浓度葡萄糖标准溶液在540nm处的吸光度,绘制葡萄糖标准曲线。然后再以β-葡聚糖为底物,通过稀释酶液与其反应生成葡糖糖或其他还原糖来测定吸光度,对应葡萄糖标准曲线计算其酶活性。得出编号为JCC5的芽孢杆菌酶活性最高,其酶活为38.92U/ml。3.通过SDS法[6]提取编号为JCC5的菌株的DNA,再通过PCR法使其扩增,再通过测序对比,得出其为枯草芽孢杆菌。关键词 葡聚糖酶,芽孢杆菌,筛选 ,DNS法,酶活测定

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