EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)是一种儿茶素，是茶叶中茶多酚的主要组成成分之一。其中EGCG的甲基化派生产物之一的EGCG3″Me对于抗过敏有显著的作用。本文主要以高山单丛茶叶为原料，以1:20的比例用50%的乙腈对茶叶进行浸提。浸提液再用氯仿、乙酸乙酯进行萃取除去色素、咖啡碱等物质。将粗品依次通过HP-20大孔树脂和ToyopearlHW-40S进行吸附洗脱.根据已有样品在已知的色谱条件下进行HPLC高效液相色谱分析并判定出峰时间，收集制备出纯度约为85%的EGCG3″Me样品。将制备好的EGCG3″Me样品进行抗氧化性研究和分析，主要采用DPPH自由基清除率和ABTS自由基清除率的测定来研究其抗氧化性。该实验为深入了解EGCG3″Me的作用机理以及日后发展甲基化EGCG的产品开发提供支持。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
一、前言1
二、实验方法3
（一）试剂和仪器3
1．仪器 3
2．试剂3
（二）实验内容3
1．茶多酚的粗提 3
2. EGCG3"Me的提取3
（1）HP20大孔树脂吸附洗脱3
（2）ToyopearlHW40S吸附洗脱4
3. EGCG3"Me的抗氧化性研究 4
（1）DPPH自由基清除率的测定4
（2）ABTS自由基清除率的测定4
三、实验结果与分析 5
（一）甲基化儿茶素的分离纯化5
1．茶多酚的粗提结果5
2. EGCG3"Me的提取结果5
（1）HP20大孔树脂吸附洗脱结果5
（2）ToyopearlHW40S吸附洗脱结果6
（二）EGCG3"Me的抗氧化性研究7
1.DPPH自由基清除率的测定结果7
2.ABTS自由基清除率的测定结果8
四、结论 9
致谢10
参考文献11
EGCG3″Me的制备与抗氧化特性研究
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安全 殷未
引言
高山单丛是中国众多传统名茶中的一种，单丛茶主要产自中国广东地区，是一种半发酵乌龙茶，通常这种半发酵茶叶介于全发酵的红茶和不发酵的绿茶之间,具有色香味道甘甜的特点。单丛茶颜色多为乌褐色，条索紧结，单丛茶和多数绿茶性质相同，茶叶中的主要成分主要为茶多酚 [1] 。茶叶中含有多种营养物质，其中主要包括有花色苷类、黄酮类、黄酮醇类等，多酚类物质的总称为茶多酚，其中儿茶素在茶多酚中含量最高可达到6080%。根据多年来对茶叶的研究，茶多酚在解毒和抗氧化性上表现出具有极强的作用。儿茶素是一种重要的生理活性物质[2]，主要由表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）以及表儿茶素没食子酸酯（ECG）等单体组成。EGCG占茶叶干重的 8%~15%[3],是儿茶素中的主要成分之一，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗血管增生、以及抗肿瘤作用[4]。
EGCG是茶叶中含量最高的活性水溶性成分，也是最重要的一种儿茶素组分。EGCG具有酚类抗氧化剂的通用性，因其特殊的立体化学结构中有6个邻位酚羟基使得EGCG具有非常强的抗氧化活性，其抗氧化活性是众所周知抗氧化性极强物质Vc的一百多倍，比Ve也要高出二十多倍。EGCG超强的抗氧化性使得其具有超强的自由基清除能力，从而使得EGCG在抗癌和心血管疾病方面表现出强大的功能，在改善癌细胞对化疗的敏感性并减轻对心脏的毒性上起到了重要作用。
近年来 Sano[5]等从台湾冻顶乌龙茶中分离纯化出两种甲基化儿茶素,即EGCG3"Me以及EGCG4"Me。Amarowicz R 等[6]随后又进一步分离出了两种甲基化儿茶素。研究表明,甲基化儿茶素在对于花粉过敏等一系列过敏反应的治疗上表现出一定的效果[7]。它们的生物学功能同样在动物体内外的临床实验中被证实。花粉过敏症是一种目前较为普遍,患者较多的特异性过敏反应之一，通常花粉过敏产生的影响主要是引起呼吸道、眼部不适的表现。研究表明，细胞内产生过敏反应的主要受器是IgE。甲基化EGCG拥有可以阻隔 IgE 受器的作用[8]。科学家于1982 年首次从绿茶中分离出甲基化EGCG——EGCG3"Me[9]。甲基化EGCG具有一定的抗过敏活性,当今日本约有百分之30以上的人群患有程度高低不一的花粉症过敏,所以有关甲基化EGCG的制备方法和甲基化EGCG相关的生理学特性的研究广泛受到学术界和相关产业领域人士的高度重视。
由于EGCG3"Me具有极强的抗过敏性，故有关EGCG3"Me的研究受到了学术界专家和学者的重视。研究表明在抑制I和 IV 型过敏反应上，甲基化儿茶素 EGCG3"Me和EGCG 4"Me的抑制效果强于EGCG。IgE是细胞内产生过敏反应的主要受体[10]，甲基化EGCG可以抑制IgE受体的表达，通过抑制嗜碱细胞达到阻止组织胺的释放，从而表现出抗过敏的作用。因此甲基化儿茶素可以抑制多种速发性过敏反应的发生[11]。通过已有的研究可以看出EGCG3"Me在抗过敏的作用上具有充分研究开发利用的价值。
图1 EGCG3"Me的结构式
茶树的品种、茶叶的成熟度，以及对于茶叶不同的加工方法等多种因素对茶叶中甲基化儿茶素的含量有着极为重要的影响，本实验根据课题研究内容，选择以广东潮安凤凰山区产出的高山单丛茶叶为原料,探索出利用大孔树脂HP20和ToyopearlHW40S两种柱层析的方法分离纯化提取出茶叶中的甲基化儿茶素，并摸索出提高样品纯度的实验方法。实验采用 TSKgelODS100Z色谱柱,在设定的色谱条件利用高效液相色谱法，对实验样品高山单丛茶中EGCG3″Me的含量进行快速分析。
大量的实验结果表明茶多酚是一种良好的纯天然抗氧化剂和抑菌剂[12]，且安全无毒。抗氧化是茶多酚的一种重要特性，主要是由于茶多酚分子中含有酚羟基，酚羟基游离出H+使得多酚类物质含有一定的酸性，在酸性条件下会使细菌发生蛋白质变性，起到杀菌的作用。茶多酚中含有酚羟基[13]，酚羟基可以使油脂发生氧化，从而抑制油脂中过氧化物的生成，使得茶多酚具有抗氧化的作用。本实验主要利用制备出来的纯度较高的EGCG3″Me样品进行抗氧化性研究和分析，通过样品对DPPH和ABTS这两种自由基清除率的测定来研究的EGCG3″Me样品抗氧化性能力。通过对EGCG3″Me抗氧化特性的研究，深入了解EGCG3″Me的抗氧化功能的作用机理，为拓展甲基化儿茶素的相关产品的生产加工提供相关功能知识的研究。

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