猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因PCR-RFLP分析[20200507184744]
摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是影响世界养猪业的一种最重要病原，病毒GP5和NSP2基因容易变异，存在多个基因亚型。本研究采用DNA STAR软件分析美洲型PRRSV不同类型分离毒株NSP2基因限制性酶切位点，发现其BanⅠ、SacⅡ和EcoR V位点存在明显差异。采用RT-PCR方法从传统PRRSV VR2332和高致病PRRSV毒株BB0907的NSP2基因, 应用这3种酶对PCR产物进行限制性片段长度多态性( RFLP) 分析，结果为：VR2332和BB0907毒株NSP2基因RFLP模式分别为3-1-2和4-2-1。采用该方法检测30株江苏及周边地区PRRSV分离株，结果显示：30株分离株可分为6种不同的RFLP模式,其中，12株RFLP模式为4-2-1,占40%；10株RFLP模式为1-1-1，占33.3%；3株RFLP模式为3-1-1,占10%；2株RFLP模式为1-2-2，占6.7%；2株RFLP模式为4-1-2,占6.7%；1株RFLP模式为2-2-2，占3.3%，表明该地区PRRSV流行毒株存在基因变异，NSP2基因PCR-RFLP方法可用于PRRSV基因分型。
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关键字:猪繁殖与呼吸综合征病毒;RT-PCR;限制性片段长度多态性分析
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
1　引言2
2　材料与方法3
2.1 毒株3
2.2　酶和试剂3
2.3 仪器和设备3
2.4　 酶和引物的选择3
2.5　RT-PCR3
2.5.1 引物4
2.5.2　总RNA提取4
2.5.3　cDNA合成4
2.5.4　PCR4
2.6　 PCR产物回收与纯化4
2.7　限制性长度多态性分析（RFLP)5
2.8　RFLP模式的确定5
3　结果与分析5
3.1　酶的选择 5
3.2　PCR产物RFLP分析类型5
3.3　PRRSV PCR-RFLP分型6
3.4　PRRSV参考毒株PCR-RFLP分型6
4　讨论7
致谢8
参考文献8
猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因PCR-RFLP分析

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