【目的】建立HPLC法测定氢溴酸常山酮的含量。 【方法】采用Hedra-ODS-2（250×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以95%乙腈（A）– pH 4.3醋酸铵溶液（B）为流动相，洗脱比例（22 % A, 40 % A, 30 % A）流速1.0 mL·min-1，检测波长为243 nm，柱温为35 ℃，进样量20 μL。 【结果】氢溴酸常山酮在12～45 μg·mL-1浓度范围内，呈现良好的线性关系(r > 0.999 0)，回收率在99.0 %～101.9 %之间，中间精密度试验平均含量为100.4 %，重复性试验平均回收率为99.3 %。 【结论】经方法学验证，本文建立的含量测定方法操作简单，结果准确，重现性好，可用于氢溴酸常山酮原料药的测定。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1仪器2
1.1.2试剂2
1.2方法 2
1.2.1液相选择2
1.2.1.1流动相选择2
1.2.1.2流动相比例的调选2
1.2.2溶液配制2
1.2.2.1醋酸铵水溶液(稀释液)配制2
1.2.2.2对照品溶液的配制3
1.2.2.3供试品溶液的配制3
1.2.3测定方法3
2结果与分析3
2.1色谱条件分析与确立3
2.1.1色谱条件选择试验3
2.1.2色谱条件确立3
2.2线性关系考察3
2.3专属性实验 3
2.4溶液稳定性试验4
2.5精密度试验4
2.5.1重复性平均加样回收率试验4
2.5.2中间精密度4
2.6准确度试验4
2.7含量测定4
图表5
3讨论 6
3．1流动相比例的确定6
3．2含量测定及方法学验证6
致谢6
参考文献7
氢溴酸常山酮含量测定 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072^ 
方法的建立及其验证
引言
氢溴酸常山酮，C16H17BrClN3O3HBr（Fig 1），是人工合成的具有广谱抗球虫作用，对鸡的柔嫩(tenella)、毒害(nelatrix)、堆型(acerulima)、巨型(maxima)和布氏(brunetti)艾美耳球虫均有作用，对球虫的子孢子，第一代裂殖体和第二代裂殖体均有明显的抑杀作用，与其他抗球虫药无交叉耐药性的一种新化合物。氢溴酸常山酮（Halofuginone Hydrobromide）是一种从植物常山中分离出来的喹唑啉酮类生物碱—常山碱的卤代衍生物，现在也成功由化学反应合成[12]。氢溴酸常山酮作为着一种高效抗球虫药，是有美国氰胺公司（Cyananmid）于1976年人工合成，后来转让给法国罗素优克福（Roussel Uclaf）公司生产，精加工后，冠以商品名“速丹（Stenorol）”上市。20世纪80年代后期，氢溴酸常山酮预混剂进入我国抗寄生虫市场，成为我国用量较大的抗球虫药物之一。氢溴酸常山酮用量小，杀虫效果好，且毒副作用小，无交叉耐药性，故被广泛用来预防和治疗球虫病，在国内国际上的需求量十分大[36]。
氢溴酸常山酮为白色或白色结晶性粉末，无臭，无味，稳定性好[7]。高效液相色谱法是常山酮含量测定应用较广泛的方法。常山酮结构里含有共轭π键，在紫外区243nm处有强烈的吸收，因此选择检测波长为243nm[8]。曹莹[9]等报道了鸡肝组织中氢溴酸常山酮残留的HPLC检测方法，采用乙腈醋酸盐缓冲液水为流动相；因此，本次试验将采用高效液相色谱法对氢溴酸常山酮的含量进行测定并验证其方法的可行性[1019]。
1 材料与方法
1．1材料
1．1．1仪器
高效液相系统：SHIMADZU LC20A系列高效液相色谱仪，SPD20A紫外检测器，SPDM20A检测器，SIL20A自动进样器，岛津LCsolution色谱工作站，HedraODS2（250×4.6mm）色谱柱。
1．1．2试剂
氢溴酸常山酮（对照品），氢溴酸常山酮（样品），醋酸铵（分析纯）
醋酸（分析纯），甲醇（分析纯），乙腈（色谱纯），娃哈哈纯净水
1．2方法
1．2．1液相条件选择
1.2.1.1流动相选择
根据药品性质及其相关文献记载，选择95%乙腈（A）和醋酸铵水溶液（pH4.3）（B）为流动相。
1.2.1.2流动相比例的调选
根据参考文献及流动相与样品极性判断设定三个浓度进行试验（22% A, 40% A, 30% A），根据保留时间、样品中成分分离度、峰形确定洗脱液比例。
1．2．2溶液配制
1.2.2.1醋酸铵水溶液（稀释液）配制
取醋酸铵19.4 g，加纯净水400 mL，溶解，加30%醋酸30 mL，加水使成500 mL，摇匀，过滤，即得。
1.2.2.2对照品溶液的配制
称取常山酮原料供试品约7.5 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加入5 mL甲醇溶解，再用醋酸铵水溶液定容，超声摇匀，再用稀释液逐级稀释，配制成每1 mL约含30 μg的样品溶液。
1.2.2.3供试品溶液的配制
称取常山酮精制品两份，每份约7.5 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加入5 mL甲醇溶解，再用醋酸铵水溶液定容，超声摇匀，再用稀释液逐级稀释，配制成每1 mL约含常山酮30 μg的对照品溶液。
1．2．3测定方法
照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录ⅤD）[19]测定，精密量取供试品及对照品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品含量照外标法计算。
2 结果与分析
2．1色谱条件分析与确立
2．1．1色谱条件选择试验
表1 流动相比例调整
流动相比例（B：A）
78 : 22
60 : 40
65 : 35
70 : 30
色谱结果
拖尾严重
保留时间偏后

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