浦东新区犬细小病毒病流行病学调查及防制措施
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法1
1.1调查对象 1
1.2 调查方法和指标 1
1.2.1临床诊断1
1.2.2 胶体金快速检测试纸2
1.2.3 犬细小病毒PCR检测2
1.2.4 血液常规检测2
2 结果与分析2
2.1发病年龄分布情况2
2.2发病性别分布情况3
2.3发病品种分布情况3
2.4发病季节分布情况3
2.5发病类型分布情况3
2.6免疫状况与发病关系4
2.7诊断方法情况4
2.8治愈情况4
2.9检测结果分析4
2.9.1 临床检查4
2.9.2 胶体金快速试纸5
2.9.3 PCR检测5
2.9.4 血常规6
3 讨论6
3.1犬细小病毒病与年龄、品种的关系6
3.2 犬细小病毒病与季节、发病类型的关系6
3.3犬细小病毒病与免疫状态的关系6
3.4犬细小病毒病的预防及治疗7
4 小结7
致谢7
参考文献7 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: &351916072&
浦东新区犬细小病毒病流行病学调查及防制措施
引言
近年来，随着人们生活水平的提高，浦东新区饲养犬者日益增多，但由于人们缺乏相应疫病知识，导致犬细小等传染病时有发生，严重危害着宠物的健康并且带来一定的经济损失。犬细小病毒病是一种高度接触性、烈性传染病，传染性强，死亡率高。临床上主要以剧烈呕吐、出血性肠炎、心肌炎和白细胞减少等为特征，世界各地各年龄犬均可感染，其中幼龄犬发病率高，是危害养犬行业最为严重的传染病之一。此病在初期经药物治疗具有一定疗效并且预后良好。本课题对浦东新区犬细小病毒病的流行病学进行调查研究，并提出今后的防制措施和意见。
1 材料与方法
1．1 调查对象
对浦东新区四家宠物医院20122014年接诊的共957例犬细小病毒病病例进行流行病学调查与分析。
1．2 调查方法和指标
1．2．1 临床诊断
1.2.1.1 流行特点 该病潜伏期714天，犬是主要宿主，各年龄和品种的犬均可感染。无明显季节性，一年四季均可发生，以冬、春季多发。病犬是主要传染源，可通过直接接触或消化道感染传播。
1.2.1.2 临床症状 感染呈阳性的犬，临床上分为三种类型。①肠炎型：多见于青年犬，病犬初期精神沉郁，食欲废绝，体温升高，轻便或轻微呕吐，随后发展为频繁呕吐和剧烈腹泻。粪便先为黄色或灰黄色，覆有粘液和伪膜，其后排出恶臭的酱油样或番茄汁样血便。后期病犬体温降至常温以下，迅速脱水，消瘦，可视粘膜苍白，眼窝深陷，被毛凌乱，身体散发出特异性气味，耳鼻、四肢发凉，精神高度沉郁，休克，急性衰竭而死。病程短的45天，长的一周以上。（2）②心肌炎型：此类型发病数较少，一般12月龄幼犬多发，常突然发病，数小时内死亡。病犬精神、食欲正常，偶见呕吐或拉稀，可视粘膜苍白，有时体温升高，心律不齐，此类型病例多死于心力衰竭，极少数可以痊愈。③混合型：兼有肠炎型和心肌炎型症状。
1．2．2 胶体金快速检测试纸
用棉拭子蘸取少量病犬粪便，浸入装有1ml反应缓冲液的样品收集管搅匀，使用配套滴管吸取被萃取过的样品稀释液，于样品管中精确缓慢加入4滴稀释液，510分钟后判定结果。如在结果窗中只出现一条“C”带，说明结果呈阴性；若出现两根条带（“T”和“C”），无论哪条先出现都表明结果呈阳性；若两条带都没有或只有“T”带，则结果判为无效，需重新检测。
1．2．3 犬细小病毒PCR检测
1.2.3.1 试剂及仪器 PCR扩增试剂盒购自大连宝生物公司；AxyGen核酸提取试剂盒，DL2000 Marker等；Bio Rad PcR扩增仪、台式高速冷冻离心机(BACKMAN); Bio Rad电泳仪、电泳槽，GDS8000PC凝胶成像及分析系统(英国UVP公司)。
1.2.3.2 病料的采集及处理 用棉拭子蘸取少量病犬粪便，浸入少量生理盐水，留取上清液待检。CPV阳性对照和阴性对照做同样处理。
1.2.3.3 DNA抽提 取研磨的犬样本上清200µL，加入DNA裂解液Buffer VL，涡旋震荡混合均匀，静置5min；加75µL Buffer VN，涡旋振荡混合均匀，12000r/min离心5min；将上清转移到新的2mL离心管中，加300µL异丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6~8次，混合均匀；将制备管置于2mL离心管中，取混合液移入制备管中，6000r/min离心1min；弃滤液，将制备管置回到于2ml离心管中，加500µL Buffer W1A，室温静置1min。12000r/min离心1min；弃滤液，将制备管置回到2ml离心管中，加800µL Buffer W2，12000r/min离心1min；将制备管置回到2mL离心管中，12000r/min离心1min；将制备管置于洁净的1.5mL离心管中，在制备管膜中央加40~60µL Buffer TE，室温静置1min。12000r/min离心1min洗脱DNA,20℃保存备用。
1.2.3.4 PCR检测 在0.2mLPCR管中，按每个样品10倍Taq酶浓缩缓冲液2.5μL、d NTP 0.5μL、Taq酶0.5μL、DNA模板2μL、上游引物和下游引物（CPVF、CPVR）各0.5μL、三蒸水18.5μL，配制PCR检测体系。将PCR管置PCR仪上按如下程序扩增：首先94℃变性2min；再94℃、30s，55℃、30s，72℃、40s进行35个循环；最后72℃、3min。用TBE电泳缓冲液配制1.5%的琼脂糖平板（含0.5μg/mL EB），将凝胶平板放入水平电泳仪，使胶面刚好没入电泳缓冲液，将10μLPCR产物和2μL加样缓冲液混匀后加入样品孔。在电泳时设立DL2000 Marker作对照。5V/cm 电泳约30min，当溴酚蓝到达底部时停止，用凝胶成像系统观察结果。
1.2.4 血液常规检测 取患犬血样，经预处理后使用血细胞分析仪进行检测，分析血液细胞数据。
2 结果与分析
2．1 发病年龄分布情况
本次收集浦东新区4家宠物医院犬细小病毒病门诊病例，经检测确诊阳性病例957例，年龄在0—15岁之间，3月龄以下犬占50.37%，3—6月领占31.87%，6—12月龄占15.88%，主要是因为幼犬抵抗力低下，宠物商店饲养管理条件差，加之有的母犬没有注射过疫苗，导致幼犬发病率高，而一岁以上的成年犬抗感染能力强，发病率只有1.88%。分布情况见表1。
原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/43650.html
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