白细胞介素8 (Interleukin 8，IL-8)是体内炎性反应应答的主要介质之一，也是巨噬细胞和上皮细胞等分泌的细胞因子。该基因具有促进炎性反应进程、刺激血管形成、调节宿主免疫等功能，并与多种炎性反应性疾病、肿瘤的发生密切相关。本试验将IL-8基因作为猪免疫应答抗性的候选基因，以大白、长白和松辽黑猪三个品种猪为实验材料，通过PCR扩增和PCR产物直接测序技术，筛选IL-8基因外显子区域SNP位点，鉴定出免疫应答抗性相关的分子遗传标记位点，为进一步应用于标记辅助选择培育具有抗性的猪新品系提供科学参考。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料和方法 2
1.1 实验材料 2
1.1.1 实验动物 2
1.1.2实验药品和试剂 2
1.1.3实验仪器 3
1.2 常规溶液及试剂配制 3
1.3试验方法及步骤 3
1.3.1引物的合成 3
1.3.2 基因组提取 4
1.3.3 PCR扩增 5
1.3.4 琼脂糖凝胶电泳 5
1.3.5 PCR产物直接测序 6
2 结果与分析 6
2.1 猪耳组织基因组提取结果 6
2.2 PCR扩增结果 7
2.2.1 不同引物的梯度PCR检测 7
2.2.2不同引物的PCR扩增结果 8
2.3 猪IL 8基因多态性检测 9
2.4 实验结论 11
3 讨论 11
致谢 12
参考文献 12
猪白细胞介素8基因的鉴定分析
引言
引言
白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类趋化因子[1]。白细胞介素8（Interleukin 8, IL8）在炎症反应中趋化中性粒细胞、T淋巴细胞及嗜碱性粒细胞至病灶部位，同时，趋化性对不同细胞各有差异。IL8与中性粒细胞接触后产生形态变化，定向游走至反应部位，释放超氧离子和初级颗粒组分，导致 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
机体局部炎症反应，达到杀菌和细胞损伤的目的[2]。IL8在信息传递，激活与调节免疫细胞，介导中性、噬碱性细胞活化、增殖与分化及炎症反应中起着重要作用，能促进炎性反应进程、刺激血管形成、调节宿主免疫功能，及与多种炎性反应性疾病和肿瘤发生密切相关。
IL8通过自分泌方式可提高肿瘤细胞的增殖和存活能力，激活肿瘤血管的内皮细胞，从而促进肿瘤的血管生成，同时诱导肿瘤内部的嗜中性粒细胞趋化渗透，并可以通过诱导肿瘤相关巨噬细胞，分泌额外的生长因子促进肿瘤细胞的侵袭和迁移[3][4][5][6]。IL8信号可通过信号级联反应激活多种转录因子，并具有通过调节MAPK信号激活触酶蛋白和E2F转录活性的能力。IL8在血管再生、细胞周期管理、迁移和侵袭以及逃避凋亡等与肿瘤进程相关的独立因素中可诱导多基因转录，导致一系列转录因子活动性增加[7][8]。IL8作为自分泌生长因子和正反馈因子，直接促进内膜基质细胞生长，在内异症的发生和发展中起重要作用。据王健等研究报道IL8在子宫内膜异位症中的表达及其发病机制显著相关，检测发现内异症患者与对照组腹腔液中IL8的表达水平差异显著[9][10]。
猪IL8基因位于8号染色体7408353074086750b 区间，(http://asia.ensembl.org/Sus_scrofa/Gene/Summary?db=core;g=ENSSSCG00000008953;r=8:7408353074086750）。基因组序列全长为3220bp，由4个外显子和3个内含子组成。mRNA序列全长为1488bp，编码103个氨基酸。IL8基因有2个剪接体：cxcl8001和cxcl8002。基于IL8在炎症反应、免疫抗性中的重要作用和前期仔猪免疫应答抗性RNA测序结果，本试验筛选效应显著的猪IL8基因作为免疫应答抗性候选基因进行研究，寻找、鉴定其功能性突变位点，探索其在免疫应答机制中的关键作用[11]。筛选出与抗性相关的分子遗传标记，应用于标记辅助选择，对培育具有抗性的猪新品系具有十分重要的科学意义。
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
猪群来自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所昌平实验猪场，包括长白猪83头仔猪；大白猪195头仔猪；松辽黑猪89头仔猪，共计367头。采集完成后，样品置于冰盒中保存，然后移至−20℃冰箱保存。
1.1.2实验药品和试剂
dNTPs( dATP、dTTP、dCTP、dGTP)：宝生物工程（大连）有限公司
Taq DNA Polymerase： 宝生物工程（大连）有限公司
DNA Marker(2kb ladder;1kb ladder)： 宝生物工程（大连）有限公司
琼脂糖（Agrose）：北京普博欣生物科技公司
6× Loading Buffer：宝生物工程(大连)有限公司
无水乙醇（Ethanol）A.R：北京化工厂
TAE溶液：北京百泰克生物技术有限公司
凝胶回收试剂盒：北京天根生物科技公司（TIANGEN）
Goldview：pbhgv1
T ris、EDTA、CaCl2：美国Sigma公司
其它常规试剂均购自大学物资供应科
1.1.3实验仪器
漩涡混合器：Kylinbell Company
型稳压稳流电泳仪：北京君意东方电泳设备有限公司
凝胶成像系统：上海天伦科技有限公司
台式高速低温离心机：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司
梯度PCR仪：BIORAD Company
可调式微量移液器：德国Eppendorf公司
数显电子恒温水浴锅：常州国华电器有限公司
电子天平：上海浦春计重仪器有限公司
分光光度计：(Nano) Thermo Company
高温烘箱：上海博讯实业有限公司医疗设备厂
1.2 常规溶液及试剂配制
TAE(1×)：800ml蒸馏水中加入20ml TAE(50×)。

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