3猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的一种高接触性肠道传染病，临床症状表现为哺乳仔猪的呕吐、水样腹泻、脱水。
目 录
Abstract：. 4
Key words: 4
引言： 4
1 材料与方法 5
1.1 实验材料 5
1.1.1病毒毒株 5
1.1.2 细胞 5
1.1.3主要试剂及配制 5
1.2 PEDV的传代培养 6
1.2.1细胞复苏 6
1.2.2细胞传代培养 6
1.2.3 PEDV的传代培养及病变观察 6
1.2.4 PEDV病毒的收集与保存 6
1.3 PEDVSCMS毒株培养特性鉴定 7
1.3.1空斑实验纯化病毒 7
1.3.2 PEDVSCMS毒株在Vero细胞传代培养的稳定性 7
1.3.2.1不同世代病毒滴度的测定 7
1.3.2.2 病毒生长曲线测定 7
1.4 RTPCR检测细胞培养液中的PEDV 7
1.4.1病毒RNA的提取 7
1.4.2 RTPCR 8
1.4.2.1反应体系 8
1.4.2.2 PCR扩增条件： 8
1.4.3 RTPCR产物的鉴定 8
1.5 PEDV 部分S基因的PCR扩增、克隆与基因测序 8
1.5.1 引物设计 8
1.5.2 PCR扩增 8
1.5.3 胶回收 9
1.5.4 重组质粒构建 9
1.5.5 菌液PCR鉴定 10
1.6 PEDV S基因编码氨基酸序列比对分析 10
2 结果与分析 10
2.1 病毒传代培养与鉴定 10
2.1.1 Vero细胞的培养 10
2.1.2.PEDV的增殖培养及病变观察 10
2.1.3. PED *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
V 种毒的遗传稳定性检验 11
2.1.3.1 PEDV 病毒滴度 11
2.1.3.2 PEDV 病毒生长曲线 12
2.1.4 RTPCR检测 12
2.2 S基因序列测定与分析 13
2.2.1基因测序 13
2.2.2 S基因核苷酸同源性分析 13
2.2.3 S 基因编码氨基酸序列分析 13
3 讨论 17
致谢 18
参考文献： 18
图1 细胞培养12h结果 10
图2 细胞培养24h结果 10
图4 接毒12h病变 11
图4 接毒18h病变 11
图4 接毒24h病变 11
图6 接毒36h病变 11
图7 lgTCID50随病毒传代的变化趋势 11
图8 PEDV MS株病毒生长曲线 12
图9 PEDV种毒的PCR检测结果 12
图10 S基因核苷酸同源性分析 13
图11 MS和MS纯化F20代S基因核苷酸序列主要缺失、插入和突变位点 14
图12 S基因氨基酸同源性分析 13
图13 MS和MS纯化F20代S基因氨基酸序列对比分析 17
猪流行性腹泻病毒SCMS株的传代培养特性及部分S基因序列
分析
动物医学专业学生 孙莹
指导教师 王先炜
由于死亡率较高常对养猪业造成巨大损失。本实验将实验室分离保存的PEDVSCMS毒株在非洲绿猴传代肾细胞（Vero）上进行纯化、传代增殖培养，并测定不同代次病毒的TCID50来评价其在细胞上的增殖稳定性。结果表明，经三次噬斑纯化后，获得的纯化病毒繁殖滴度高、稳定。另外，本实验还对PEDVSCMS毒株的部分S基因序列进行分析，结果表明SCMS毒株的S基因和其他地方毒株的核苷酸与氨基酸序列有同源性，系统进化分析表明，SCMS毒株S基因与CV777株的亲缘关系较近。本研究为PEDCVSCMS毒株的生物学特性、遗传进化研究奠定了基础。
Study on the feature of Porcine Epidemic Diarrhea Virus SCMS strain and sequence analyzing of S gene
Student majoring in Veterinary Medicine Ying Sun
Tutor Xianwei Wang
Abstract：Porcine Epidemic Diarrhea (PED) is a severe infectious disease which is caused by the porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), which is characterized by diarrhea ,vomiting and higher mortality. In this study, PEDVSCMS was cultured and pured in Vero cells. And the TCID50 of different generations of the virus were tested in order to study the stability of the virus. The results showed that the pured virus was obtained, the TCID50 of the generation 5,10,15,20,25 and 30 were 105.3, 105.7, 106.2, 105.4, 105.3and 105.3. In addition, the sequences of part of S gene of PEDVSCMS were analyzed, and the results show that the nucleotide and amino acid sequence of S gene in SCMS strain have sequence homology compared with and other local strains. Based on genetic evolutionary, the PEDVSCMS strain was in the same phylogenetic relationship with vaccine strain CV777. This study laid the foundation of the research of biological characteristics and genetic evolution of PEDV.

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