金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌之一，金葡菌生物被膜的形成可以导致细菌对抗生素耐药，所以开发新型抗菌药物迫在眉睫。本研究探究了鱼腥草精油和利福昔明对于奶牛乳房炎源金葡菌悬浮菌的抑菌圈直径、MIC、MBC和细菌生长曲线等的影响，并研究了两者联合使用时的FIC。运用刚果红染色法和结晶紫染色法筛选强成膜菌株，比较利福昔明和鱼腥草精油对于金葡菌被膜形成的影响。结果显示利福昔明与鱼腥草精油对金葡菌的MIC 范围分别是0.0156～32μg/ml和1.25%～5%，FIC值为0.625，说明两者均具有抗菌活性并且联用呈相加作用。此外我们运用刚果红染色法和结晶紫染色法定性和定量地检测出标准株和临床菌株均具有生成生物被膜的能力，并进一步使用结晶紫半定量法判定利福昔明和鱼腥草对金葡菌生物被膜生成的影响情况，其OD值分别为1.506和1.208，表示鱼腥草精油抑制生物被膜形成能力更强，为临床治疗金葡菌感染提供新的治疗方案。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）2
1 材料与方法4
1.1 材料 4
1.2 方法 4
1.2.1 菌悬液的配置4
1.2.2 滤纸片扩散法评价利抑菌效果4
1.2.3 利福昔明和鱼腥草精油对金葡菌悬浮菌的MIC和MBC的测定5
1.2.4 利福昔明和鱼腥草精油对金葡菌悬浮菌生长的影响5
1.2.5 利福昔明和精油联用对金葡菌悬浮菌的FIC 的测定5
1.2.5 金葡菌生物被膜的定性与定量检测6
1.2. 6 利福昔明和鱼腥草精油对生物被膜形成的影响 6
2 结果与分析7
2．1 利福昔明与鱼腥草精油的滤纸片扩散实验7
2. 2利福昔明和鱼腥草精油对金葡菌悬浮菌的MIC与MBC的测定7
2．3利福昔明和鱼腥草精油作用下金葡菌悬浮菌生长曲线的测定8
2. 4利福昔明和鱼腥草精油的联合抑菌效果评价9
2. 5 金葡菌生物被膜的定性与定量检测9
2. 6 利福昔明和鱼腥草精油对生物被膜形成的影响 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072$ 
9
3讨论10
致谢11
参考文献11
中药单体对金黄色葡萄球菌生物被膜生长干预作用
引言
引言
奶牛乳房炎是兽医临床上常见疾病，它会使患畜产奶的数量和质量降低甚至停止产奶，造成奶牛养殖业巨大的经济损失，并影响公共食品卫生安全。金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎的主要病原，其所占比例最大并且最难治愈，危害最为严重。虽然一些抗生素对金葡菌感染有效，但是临床应用之后会产生耐药性，所以可广泛应用的治疗方案十分短缺。金葡菌形成的生物被膜是其对抗生素产生耐药的重要原因之一，其介导的感染发病迅速并且难于治疗。金黄色葡萄球菌不但能寄生在细胞外的乳汁中，而且还能在吞噬细胞内定居，形成胞内感染。由于抗生素不能进入宿主细胞，胞内感染就成为金黄色葡萄球菌逃避抗生素作用的有效手段，这可能成为再次感染的病原，并且由于耐药菌株的不断出现，使抗生素治疗金黄色葡萄球菌性乳房炎的疗效不理想。众多研究表明中药的抗菌疗效非常显著，中药中结构独特的小分子物质有良好的药理活性，可以为临床治疗金葡菌引起的乳房炎提供新的诊疗思路。
生物被膜是附着于惰性或活性实体表面的细菌细胞和包裹细菌的水合性基质所组成的结构性细菌群落，它在电镜下呈连片的菌体团块，这种模式的生长会使细菌基因的活化和蛋白的合成方面的生理机能发生改变[1]。其发育过程由附着、成熟、分散三个阶段组成。在附着时期，细胞与表面结合，此过程主要由粘附基质分子家族的蛋白调控，使细胞在表面上固定进而繁殖形成粘性聚集体菌落。细胞分裂和由此产生的细胞外基质介导了生物被膜的成熟，并构成了生物被膜的结构支架[2,3]。在特定的细胞数量达到一定程度后，细胞外基质会发生破裂，被膜里的细菌也会因此分散，在边缘部位重新形成生物被膜[4,5,6]。
材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株
金黄色葡萄球菌标准株ATCC29213，奶牛乳房炎源临床株19号由大学基础兽医系药理教研室保存。
1.1.2 培养基
胰酪大豆胨液体培养基：购买自高科园海博生物技术公司；
MH肉汤：购买自百思生物技术公司；
刚果红琼脂平板：取刚果红0.2g，脑心浸液琼脂12.5g，蔗糖12.5g。之后用250ml的蒸馏水溶解溶解蔗糖和脑心浸液琼脂，在121℃条件下灭菌15min，将上述溶液相混合，倒30ml于平板上，待冷却凝固之后使用。
琼脂：购买自百思生物技术公司。
1.1.3 主要试剂与药物
利福昔明：购买自思贤制药有限公司；
结晶紫：购买自天津化学试剂所；
刚果红：购买自天津科密欧有限公司；
葡萄糖：购买自西陇科学化学试剂；
NaCl：购买自汕头市西陇化工有限公司;
Na2HPO412H20：购买自购买自汕头市西陇化工有限公司;
Na2CO3.：购买自头市西陇化工有限公司;
牛肉膏：购买自百思生物技术公司；
蛋白胨：购买自百思生物技术公司 ；
酵母浸出物：购买自百思生物技术公司；
冰醋酸：购买自上海凌峰有限公司；
甲醇：购买自上海凌峰有限公司；
乙醇：购买自上海凌峰有限公司。
1.1.4 主要仪器
96孔细胞培养板：购买自美国Coaster公司；
酶标仪：购买自美国bioTekSynergy2；
立式压力蒸汽锅：购买自上海华线医用核子仪器有限公司；
移液器：购买自德国Eppendorf公司。
恒温培养箱：购买自上海森信实验仪器有限公司；
摇床：购买自上海知楚有限公司。
1.2 方法
1.2.1 菌悬液的配置
将于80℃保藏的金黄色葡萄球菌接种于3ml TSB肉汤，在TSA培养基上划线培养，于37℃恒温培养箱内过夜培养。挑取单菌落接种于3ml TSB肉汤，放于摇床（37℃，160rpm/min）培养810h至对数生长期，取培养完成的菌液，用MH肉汤培养基稀释至106107cfu/ml的均匀菌液备用。

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