前噬菌体phiv1423基因orf1274orf1280在大肠杆菌中的分布及蛋白orf1278的免疫原性分析(附件)【字数：5593】
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.2方法 2
1.2.1 orf1274orf1280基因在大肠杆菌中的分布2
1.2.2 蛋白Orf1278的免疫原性分析3
2结果与分析5
2.1 orf1274orf1280基因分布情况5
2.2载体的构建9
2.3蛋白纯化结果9
2.4免疫原性分析9
3讨论10
致谢11
参考文献11
前噬菌体Phiv1423基因orf1274orf1280在大肠杆菌中的分布及蛋白Orf1278的免疫原性分析
引言
大肠杆菌是大肠埃希氏菌的俗称,属于肠杆菌科埃希氏菌属。[12]绝大多数的大肠杆菌在肠道内是正常菌群的主要成员，维持着肠道的正常生理功能。但某些大肠杆菌具有致病性，可以导致人或动物的胃肠等疾病。[4]
根据致病因子、致病机理及病变部位的不同，可以将致病性大肠杆菌分为肠道致病性大肠杆菌和肠道外致病性大肠杆菌两个类别。[1,3]其中禽致病性大肠杆菌就属于肠道外致病性大肠杆菌，它会引起鸡等禽类的肠道外疾病[57]，甚至会导致禽类发生急性死亡。禽致病性大肠杆菌现在已经成为了危害我国养禽业的罪魁祸首之一，不但对禽类的健康造成了危害，而且影响了蛋制品的和肉用品的产量和上 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: #351916072#
市时间，对我国养禽业的发展造成了巨大的影响。[4,8]
前噬菌体是一种感染细菌、真菌等微生物的病毒。就根据现在已经进行过基因组测序的细菌来看，含有前噬菌体或者前噬菌体不完全基因的基因组在所有细菌基因组中大约占比65%。在细菌基因中前噬菌体基因能够产生很多影响，对其致病性的增强具有重要作用。[9]
本实验室前期研究发现前噬菌体phiv1423中orf1274orf1280区域对宿主菌DE142的黏附和定殖起到促进作用，本课题对该区域的基因在大肠杆菌的分布情况进行调查，并对其中分布率较高的orf1278进行蛋白克隆表达分析蛋白Orf1278免疫原性。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 大肠杆菌菌株 本实验所用的147株菌株全部由大学微生物实验室保存。
1．1．2 实验动物 新西兰大白兔。
1．1．3 试剂 2×Taq Master mix，DL2000 DNA Marker，Goldview，50×TAE电泳缓冲液，PBS缓冲液，LB液体培养基，重组克隆试剂盒，蛋白纯化试剂盒，BCA试剂盒。
1．1．4 主要仪器 PCR仪，电泳仪和电泳槽，凝胶电泳成像系统，超声破碎仪，离心机。
1．1．5 引物 设计前噬菌体Phiv1423的基因orf1274orf1280的特异性引物。
表1 本实验所用PCR引物
Table 1 Primers used in this study
引物
序列5→3
目的片段长度/bp
orf1274
1274F
CCCATTGCCGTACAGAG
300
1274R
AACTCGTAAACCTCAAAACC
orf1275
1275F
GCCCAGTTCTTTACGCT
322
1275R
TGAGAAACCAAGATACCGC
orf1276
1276F
AACCAGTTACTTTTGAGCG
402
1276R
CTCAGGCGGTTACGAAT
orf1277
1277F
GTCCACCACTCGCCTTC
825
1277R
TCAAACTAACCCGATCCTTC
orf1278
1278F
CAGGTGTCCCGAACTGG
520
1278R
TGCTGTATCGCCGTCTTT
orf1279
1279F
AGTTCCAGCGCCAGATT
224
1279R
ATGACAGATTACGAAGACGATC
orf1280
1280F
GAACAATGACGGTTGGAGAC
1075
1280R
CTGGAGGATGACGAGGACA
orf1278
P1
gccatggctgatatcggatccATGAATTTATTTGAGCGTTTGCTG
P2
ttgtcgacggagctcgaattcTTATTTGCCATAGAGCACTTCGG
1．2 方法
1．2．1 orf1274orf1280基因在大肠杆菌中的分布
orf1274orf1280基因的PCR，所用的PCR体系均采用15μl体系（表2）：
表2 PCR体系
原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/562222.html
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