本实验对鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC进行原核表达及纯化，为鞭毛蛋白的佐剂作用研究奠定基础。以优化后的鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因组DNA为模板，利用PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC基因，将扩增产物与表达载体pET-32a连接构建重组表达质粒pET-32a-FliC，将此重组质粒转化于大肠杆菌JM109内进行扩增并提取质粒，酶切鉴定正确后将重组质粒转化至大肠杆菌BL21,经大肠杆菌BL21表达后用SDS-PAGE方法分析。由于表达量较低，因此研究不同诱导温度、不同诱导时间和不同IPTG浓度对蛋白表达的影响。以最佳的表达条件为依据，将表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后，进行SDS-PAGE 和Western blot分析。结果显示，FliC为完整的编码区基因1500 bp，蛋白相对分子质量约为52 kDa。经SDS-PAGE分析显示，在16℃、0.5mM的IPTG诱导过夜，表达效果最佳，诱导产物是与理论值一致的52kDa的目的蛋白。蛋白印记分析表明，表达的蛋白FliC可与抗His标签的一抗反应得到清晰的目的条带，表明表达的蛋白具有良好的反应原性。通过优化表达条件，鞭毛蛋白FliC以可溶性表达，纯化得到的鞭毛蛋白为后续进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1菌株与质粒 2
1.2主要试剂 2
1.3引物设计及合成2
1.4双酶切获取目的基因3
1.5FliC基因克隆及菌落PCR和双酶切鉴定3
1.6表达菌的转化及诱导小量表达3
1.7表达产物SDSPAGE电泳鉴定及Western blot分析3
1.8鞭毛蛋白Flic表达菌培养条件的优化3
1.8.1菌种活化 3
1.8.2诱导条件对表达量的影响3
1.9表达产物的纯化及SDSPAGE电泳鉴定4
2结果与分析4
2.1双酶切获取目的基因的鉴定4
2.2菌落PCR及重组质粒的鉴定4
2.3诱导小量表达的鉴定5 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 

2.3.1SDSPAGE分析5
2.3.2Western blot分析5
2.4不同诱导条件对重组蛋白表达量的影响5
2.4.1不同诱导温度对表达量的影响5
2.4.2不同IPTG浓度对表达量的影响6
2.4.3不同诱导时间对表达量的影响6
2.5表达产物的纯化及SDSPAGE的鉴定7
3讨论8
致谢8
参考文献8
大肠杆菌表达鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的初步研究

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