猪链球菌不仅是猪的重要细菌性病原，同时也是人畜共患病病原菌。猪链球菌血清型众多，至今能感染人的血清型有9种。本研究在2018年9月-2019年1月期间从江苏省某屠宰场采集生猪扁桃体4次，共采集156份扁桃体样品。以谷氨酸脱氢酶基因gdh和DNA修复蛋白基因recN作为猪链球菌种特异性基因进行PCR扩增，两者鉴定结果均为阳性的扁桃体样品占60.8%（95/156）。采用猪链球菌血清型特异性引物，检测能感染人的9种血清型分别情况，结果表明2型占6.4% （10/156）、4型占4.5%（7/156）、5型占6.4%（10/156）、9型占16.0%（25/156）、14型占0.0%（0/156）、16型占13.4%（21/156）、21型占1.3%（2/156）、24型占0.0%（0/156）、31型占16.0%（25/156）。挑选出猪链球菌阳性的扁桃体样品，继续分离单菌落，共获得了161株猪链球菌，其中未知血清型的有22株。可确定血清型的菌株共有131株，分属于13种血清型。其中分离率最高的为9型和31型，占15.5%（25/161），其余血清型的分离率分别为2型占6.2%（10/161）、3型占6.2%（10/161）、4型占4.3%（7/161）、5型占6.2%（10/161）、7型占4.3%（7/161）、8型占3.7%（6/161）、15型占0.6%（1/161）、16型占13.0%（21/161）、21型占1.2%（2/161）、28型占0.6%（1/161）、29型占0.6%（1/161）。根据前期研究结果，选择VII分泌系统效应分子结构域LXG3阳性的8菌株进行斑马鱼毒力试验，结果表明除了31型菌株2018WUSS082无致病性之外，其余菌株对斑马鱼都有一定的致病性。结论表观健康猪携带猪链球菌的阳性率较高，且血清型多而复杂，是潜在的传染源。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 菌株 2
1.2 主要试剂 2
1.3 引物2
1.4 猪链球菌选择性培养基3
1.5 扁桃体样品的采集4
1.6 细菌的增殖培养4
 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072^ 
/> 1.7 猪链球菌阳性鉴定4
1.8 对感染人的猪链球菌血清型鉴定4
1.9 猪链球菌单菌落分离鉴定5
1.10 感染人的9种血清型分离株LXG3蛋白鉴定5
1.11 斑马鱼试验5
2 结果与分析5
2.1 扁桃体样品猪链球菌鉴定结果5
2.2 扁桃体样品猪链球菌单菌落鉴定结果6
2.3斑马鱼毒力试验结果7
3 讨论7
致谢8
参考文献9
江苏某屠宰场猪链球菌分离鉴定及斑马鱼毒力试验
引言
猪链球菌（Streptococcus suis）作为革兰阳性菌，是引起猪链球菌病的主要病原，它的存在给世界范围内的养猪业带来严重的经济损失[1]。同时，猪链球菌也是非常重要的人畜共患病病原菌。猪链球菌可定殖于猪的上呼吸道，引起呼吸道感染以及脑膜炎、败血症、心内膜炎、猝死等严重侵袭性疾病[2]，猪链球菌基于荚膜多糖抗原性的不同，可分为多种血清型和部分未定型菌株；众多血清型中，能够感染人的血清型有9种分别为2、4、5、9、14、16、21、24和31型[3,4]。研究表明不仅是发病猪，健康猪群中也能检测到猪链球菌，而且健康猪群中携带的猪链球菌血清型更为复杂多样，是潜在的传染源；对健康猪群进行猪链球菌监测，特别是能感染人的血清型的检验更具公有重要的共卫生意义；对屠宰场表观健康猪进行猪链球菌带菌情况监测，是猪链球菌病流行病学调查的重要方法之一[5，6，7]。本研究通过定期采集江苏某屠宰场表观健康猪扁桃体，检测猪链球菌特别是感染人的9种血清型的分离率，为了解该地区猪链球菌病主要血清型的分布情况、制定该地区猪链球菌病的治疗和防控策略提供重要参考。
1 材料与方法
1．1 菌株
猪链球菌试验菌株由2018年9月、2018年10月、2018年12月、2019年1月在江苏省某屠宰场表观健康猪群的扁桃体中分离得到的，猪链球菌2型毒力株SC070731（阳性对照）及猪链球菌9型无毒株SH040917（阴性对照）均为本实验室保存。
1．2 主要试剂
2×Taq Master mix 购自南京诺唯赞生物科技公司，DL2000 DNA Marker 购自北京全式金生物技术公司，THB 培养基购自美国BD公司，无菌绵羊血、萘啶酮酸、结晶紫、Goldview、庆大霉素、氢氧化钠购自南京鼎国生物公司。
1．3 引物
参照文献中猪链球菌gdh、recN基因以及血清型131 型和1/2 型的特异性引物序列。由南京擎科生物科技公司合成，引物序列见表11。
表11 猪链球菌鉴定所需引物序列
Table 11 Sequence of primers required for identification of S.suis
基因名称
引物名称
引物序列
目的片段大小
退火温度(℃)
gdh
gdhF
gdhR
CCATGGACAGATAAAGATGG
GCAGCGTATTCTGTCAAACG
689bp
55
recN
recNF
recNR
CTACAAACAGCTCTCTTCT
ACAACAGCCAATTCATGGCGTGATT
336bp
55
CPS1/14
Cps1Iup
Cps1Idown
TCTTATAACAGGCGTCAAAACA
ATCGGTATAAAAGCAAGACACA
210bp
58
CPS2/1/2
Cps2Iup
Cps2Idown
TTCGTATTAACTTACTTGGCGT
TAAATCCCCATATGCCAAATCC
363bp
58
CPS3
Cps3Lup
Cps3Ldown
ACATCCATTGCAGGAGTAGT
TGCAGTTCCAAAATTCTTCGT
210bp
58
CPS4
Cps4Kup
Cps4Kdown
TGATATTGGCTATCTTTTGGGG

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/562247.html