本试验首先通过比较山羊两种超数排卵方案的冲卵数，筛选海门山羊超数排卵处理程序。然后对山羊INHA基因外显子进行扩增、测序，研究该基因多态性在海门山羊超数排卵效果的关联性，以期寻找与海门山羊超数排卵性状相关的分指标。其中INHA基因T1500C位点基因型TT、TC和CC的基因型频率分布为83.33%、12.96%、3.70%，INHA基因A1540C位点AA、AC和CC的基因型频率分布为61.11%、29.63%、9.26%。等位基因T和C的频率分别为89.82%、10.19%，A和C的频率分别为75.93%、24.07%。TT基因型的卵子数量显著高于TC型（P<0.05）。因此认为，INHA基因多态性很可能与超数排卵的卵子数量有关系，INHA可作为提高冲卵数的一个候选基因。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1试验材料 2
1.1.1 试验动物 2
1.1.2 主要试剂 2
1.1.3 主要仪器 2
1.2试验方法3
1.2.1超数排卵处理方案3
1.2.2 冲卵及数据收集3
1.2.3血样采集3
1.2.4 海门山羊基因组DNA的提取3
1.2.5 引物设计4
1.2.6 PCR扩增体系及反应程序4
1.2.7 海门山羊INHA基因SNP位点基因型分析4
1.2.8 数据处理与分析4
2 结果与分析5
2.1 不同超数排卵处理方案对冲卵数量的影响5
2.2 INHA基因PCR扩增结果5
2.3 INHA基因PCR扩增产物测序及分析5
2.4 INHA基因多态位点遗传学分析6
2.5 海门山羊INHA基因多态性与超数排卵效果的关系7
2.5.1 INHA基因T1500C位点与山羊超数排卵效果的关系7
2.5.2 INHA基因A1540C位点与山羊超数排卵效果的关系7
3 讨论 7
3.1 超数排卵 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
方案对冲卵效率的影响 7
3.2 INHA基因多态性对海门山羊超数排卵效果的影响 8
致谢8
参考文献8
INHA基因多态性与海门山羊超数排卵效果的相关性分析
引言
引言
海门山羊的产区地处长江三角洲，以海门市为中心，故得此名。海门山羊是以生产优质笔料毛为特征的皮、毛、肉兼用羊，是一种具有极大经济效益的山羊地方良种。海门山羊板皮柔韧致密；毛是上等的制笔原料；肉质肥美鲜嫩，羊肉膻味少，适口性好；其还具有性早熟、繁殖力强、产羔数多、耐高温高湿、耐粗饲、抗病力适应力强和遗传性稳定等特点。
由于自然状态下，繁殖多胎的优良母畜将耗费一生中大部分时间来承担繁重的妊娠责任，因此其繁殖的胎次较少，这不利于挖掘优良母畜的繁殖潜力[1]。采用超数排卵技术，可使闭锁卵泡内的卵子得以利用，增加排卵数量，充分利用卵母细胞资源。超数排卵即是在母畜发情的适当时期，用外源激素诱导雌性动物，使动物体内的激素达到阈值，从而诱发动物卵巢的大量的将要转化为闭锁卵泡的有腔卵泡发育成熟并排除具有受精能力的卵子的过程[2]。因而超数排卵技术也是获得大量整齐、优质的卵子和胚胎的重要方法之一。超数排卵反应良好的供体进行一次超排处理后，所获得的胚胎移植后，有可能获得其终生繁殖后代的总和。
影响超数排卵效果的因素很多，不同动物类型、不同品种、个体体况、营养水平、动物年龄、环境条件、发情周期、超数排卵时间、操作的熟练程度以及超数排卵方案的选择等都可能造成一定程度的影响[3]。卵泡刺激素（FSH）是诱导超数排卵的重要激素，它是一种由垂体分泌的糖蛋白激素，主要生理作用是促进卵泡的发育和排卵[4]。FSH是世界上公认进行超数排卵最理想的药物，因而许多超数排卵方案中都有它的存在。目前，应用超数排卵技术的主要方法有FSH+PGF2α法[5]、PVP+FSH+PGF2α法[6]、CIDR+FSH+PGF2α法、PMSG+PGF2α法等。每种方案都有其相应的优、缺点，具体要根据试验需要而进行选择。
抑制素（INH）是一种主要由卵巢中的颗粒细胞和睾丸的支持细胞分泌的，由α和β两个不同的亚基通过二硫键构成的二聚体糖蛋白质激素，是转化生长因子β超家族成员[7]，该家族成员调控细胞的生长于分化。抑制素的主要生理作用就是抑制垂体卵泡刺激素的合成与分泌，具有自分泌和旁分泌的生长因子活性[4]。抑制素循环量的减少或活性降低可能会引起FSH水平升高从而增加募集卵泡数量[8]。抑制素的α亚基是抑制素发挥生物活性的重要组成部分[1]。抑制素α基因编码抑制素的α亚基，对α亚基的免疫作用会增加FSHR的表达，从而提高卵巢对超数排卵的反应能力[8]。
繁殖性能的高低直接关系到山羊养殖业生产效率和生产成本，因此繁殖性状是山羊的重要经济性状之一。近年来，各种生产和经济性状功能基因的多态性研究已经成为动物遗传育种研究的热点之一。抑制素基因被提出作为繁殖性状的候选基因[9]，目前国内外关于抑制素基因对于绵羊繁殖性状的影响的研究较多，但对于山羊INHA基因相关的研究较少。在山羊中，目前已发现INHA基因存在遗传多态性，并在5’调控区检测到两处单核苷酸基因多态性位点[10]，且有研究报道，INHA基因的一个突变导致了关中山羊等三个山羊品种内不同基因型间产羔数的差异[11]。因此，本研究以INHA基因为研究对象，旨在探索该候选基因的多态性与海门山羊超数排卵效果的关系，为提高海门山羊超数排卵效果提供科学的依据，从而对提高海门山羊的生产效益做出贡献。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1．1．1 试验动物
用于本研究所用的海门山羊由江苏金盛山羊繁育技术发展有限公司提供，共87只，均为体格健壮、无繁殖疾病的1岁龄母羊。试验期间采用统一的饲养管理模式。试验羊超数排卵处理在海门山羊研发中心进行。
1．1．2 主要试剂
促卵泡素（FSH）、促黄体素释放激素A3（LHRHA3）、前列腺素（PG）均购于宁波市三生药业有限公司，阴道海绵栓购于北京比威克生物技术有限责任公司。PCR Mix、marker均购于TAKARA公司。基因组DNA提取试剂盒购于天根生化科技有限公司。冲卵液为DPBS加2%新生牛血清。
1．1．3 主要仪器

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