肌动蛋白丝广泛参与卵母细胞减数分裂的多个细胞过程，如极体排出和纺锤体迁移。 众所周知，Arp2/3复合体和formins作为肌动蛋白成核剂，在肌动蛋白组装过程中发挥不可或缺的作用。此外，囊泡运输也被证明参与肌动蛋白组装过程，而囊泡运输过程需要RAB家族发挥功能，其中RAB8作为RAB家族的成员，主要分布在反面高尔基体网络和基底面细胞质膜，以及两者间负责运输的囊泡上，RAB8有RAB8A和RAB8B两种亚型，RAB8A在不同组织中广泛表达，但其在小鼠卵母细胞减数分裂中的作用尚未清楚。本试验拟研究囊泡运输因子RAB8A在减数分裂过程中对肌动蛋白装配的作用。实验结果表明，RAB8A在小鼠卵母细胞的纺锤体边缘和皮质均有定位，与肌动蛋白丝的定位模式相似。RAB8A缺失导致纺锤体迁移缺陷和极体排出失败，这可能是由卵母细胞胞质和皮质肌动蛋白丝减少所致。综上所述， RAB8A在小鼠卵母细胞减数分裂过程中通过调节肌动蛋白组装进而影响极体排出。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言4
1 材料与方法5
1.1 抗体和化学药品5 1.2 卵母细胞的采集和培养5
1.3 显微注射RAB8A siRNA并设置对照5
1.4 免疫荧光和共聚焦显微镜5
1.5统计分析和荧光强度测量5
2 结果与分析6
2.1 卵母细胞成熟过程中RAB8A的亚细胞分布6
2.2 RAB8A调节小鼠卵母细胞中的极体排出6
2.3 RAB8A影响小鼠卵母细胞中的纺锤体位置7
2.4 RAB8A通过肌动蛋白影响纺锤体迁移8
3 讨论 8
致谢9
参考文献9
图1 RAB8A在小鼠卵母细胞中的定位6
图2 RAB8A调节小鼠卵母细胞中极体排出7
图3 RAB8A影响小鼠卵母细胞中的纺锤体位置7
图4 RAB8A通过肌动蛋白影响纺锤体迁移8
RAB8在卵母细胞中的表达和功能
引言
引言
哺乳动物卵母细胞减数分裂 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072^ 
过程经历连续两次细胞分裂而只复制一次母体DNA，这对于能够受精和产生整倍体后代至关重要。不对称细胞分裂是卵母细胞独特的分裂方式，在减数分裂成熟过程中，卵母细胞细胞器均发生重要变化并行使重要功能[1]。生发泡破裂（germinal vesicle breakdown，GVBD）是减数分裂开始的标志，GVBD后，微管在染色体周围组装，然后两极纺锤体形成，染色体迁移到纺锤体的赤道板[2]。随后纺锤体迁移到卵母细胞皮质，卵母细胞发生第一次减数分裂，卵母细胞排出含有一半染色体的极体[3]。之后，减数第二次分裂中期（MII）发生纺锤体组装，成熟的卵母细胞停留在Metaphase II（MII）期直至受精开始继续发育[4]。在这个过程中，胞质微丝的正常组装和聚集为推动纺锤体从卵母细胞中部到皮质部迁移提供重要保障[5]。在有丝分裂中，纺锤体的位置取决于皮质微丝与微管的相互作用。然而，在哺乳动物卵母细胞中，纺锤体的迁移与微管无关，这一点已在nocodazole处理后的实验中得到证实。相反，肌动蛋白在卵母细胞减数分裂过程中纺锤体迁移和皮质极化起关键作用。细胞松弛素B是一种作用于肌动蛋白聚合过程的抑制剂，它在卵母细胞减数分裂中阻止染色体迁移。另一方面，肌动蛋白解聚抑制剂——jasplakinolide——在卵母细胞减数分裂过程中也会阻止染色体迁移。最近的研究证实，在卵母细胞不对称分裂过程中，纺锤体迁移和皮质极性建立过程中存在潜在的肌动蛋白调节机制。
Ras、Rab、Rho、Ran和Arf亚家族是GTPase超家族的成员，在细胞分化、细胞分裂、囊泡运输、核组装和细胞骨架动力学等方面发挥着重要作用。RAB蛋白作为细胞内囊泡转运的关键调节因子，是小分子GTP结合蛋白Ras超家族中最大的亚家族的一员，现已发现至少60多种RAB家族蛋白成员，但其中大部分成员在卵母细胞中的功能尚不清楚[6, 7]。通常，RAB GTPases起分子开关的作用，可以在GTP（活性）和GDP（非活性）之间转换来限制的RAB状态[8]。RAB蛋白是膜转运的关键调节蛋白，每一个RAB蛋白都可调控一条特异的膜转运通路，且上调或下调RAB蛋白的表达对于其转运的货物蛋白质有很大的影响，进而影响到细胞的增殖、黏附以及迁移等生物过程[9, 10]。
先前研究表明，RAB10能促进EHBP1内源性结合的能力也能结合肌动蛋白细胞骨架，从而促进内质小管化[11]。个别RAB结构差异决定了它们与特定伙伴（如 GEFs, GAPs）和效应蛋白的相互作用。这些相互作用协调了RAB定位的时空调节及其打开和关闭，从而使RAB的特定功能受到严格控制，如膜成分修饰、为细胞内运输招募分子马达或招募介导与下游分子相互作用的支架蛋白，以及对肌动蛋白细胞骨架的调节。一项过表达研究发现，Rab GTPases的一个成员是肌动蛋白点的调节因子[12]。小GTP酶 RAB11和RAB35在肌动蛋白清除中的作用是限制Factin的聚合，从而限制其在细胞间桥内的积累[13]。RAB35也被发现与肌动蛋白丝，Cdc42和RhoA共定位，它可以激活Cdc42并调节轴突的向外生长和细胞形状。RAB35还可以与FACIN和RME4相互作用以调节肌动蛋白动力学并调节秀丽隐杆线虫卵母细胞卵黄蛋白受体的再循环[14]。一种Ras超家族GTPase中的另一成员RAB21，在纤维连接素诱导的组织溶解性大肠杆菌信号下促进肌动蛋白点的形成，另外，活性RAB1将WHAMM招募到成纤维细胞的动态小管泡状结构中，并在体外直接结合到WHAMM 的N端结构域。与其他G蛋白成核因子的作用不同，RAB1结合会抑制WHAMM介导的肌动蛋白组装。过表达RAB5、RAB7A和RAB21诱导肌动蛋白点在玻璃表面新生形成。
RAB8是RAB蛋白家族成员，是一种小的类RasGTP酶，包含206个氨基酸残基，包括GTP结合、水解所必需的5个高度保守区域，其相对分子质量约为24000，主要分布在反面高尔基体网络和基底面细胞质膜，以及两者间负责运输的囊泡上，可调节极化膜向上皮细胞和神经元中树突的基底外侧膜的转运。不同研究体系中RAB8所参与的细胞迁移、膜转运、神经细胞生长等生物活动都与微丝密切相关。最近已经证明成纤维细胞将新合成的蛋白质分成两种不同的途径，分别用于向细胞表面传递，这两种途径相当于上皮细胞中的顶端和基底外侧高尔基体途径。Rab8通过重组肌动蛋白和微管来调节极化膜转运，诱导新表面延伸的形成，并且在定向膜转运至细胞表面中具有重要作用。与其他GTP酶蛋白类似，RAB8能够结合GTP并水解GTP，通过GTPGDP的转换来调节小泡的融合。

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/562348.html