鸡的生产性能尤其是产蛋量主要受卵巢和卵泡发育状况的影响，探究鸡原始卵泡形成的影响因子具有重要意义。双酚A是典型的环境雌激素，对机体的生殖系统和胚胎发育产生重要影响。本试验通过孵化二组鸡胚，分别注射双酚A（0.05μg/胚）和PBS，观察卵巢形态变化，制作卵巢组织切片并染色观察内部结构差异，进行卵泡形成相关基因表达量和DNA甲基化的检测，进一步探究双酚A对鸡原始卵泡形成的作用。研究发现，双酚A对鸡胚胎期的蛋重、胚重、蛋胚比未产生明显作用；能够使卵巢组织较对照组松散坍塌，体积和表面积增大；使皮质的厚度增加、皮髓质间的界线较对照组明显；使卵母细胞囊系和各个囊系中卵母细胞数增多；抑制DNA甲基化；上调Cav、Prdm和Lhx的表达，促进原始卵泡形成和发育。本研究结果表明双酚A影响鸡原始卵泡形成，为进一步科学研究和生产工作提供了依据。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Keywords3
引言45
1材料与方法58
1.1鸡胚孵化与卵巢采集5
1.2试验试剂5
1.3试验仪器5
1.4试验溶液的配制5
1.4.1 双酚A配制5
1.4.2 PBS配制5
1.4.3 RNA提取相关试剂配制5
1.4.4 4%多聚甲醛固定液5
1.5试验路线和指标测定58
1.5.1 称量蛋重、胚重计算蛋胚比并观察卵巢形态6
1.5.2 卵巢组织切片的制作与HE染色6
1.5.2.1 石蜡切片的制作6
1.5.2.2 切片HE染色6
1.5.2.3 结果分析6
1.5.3 DNA的提取和DOT试验67
1.5.3.1 DNA提取6
1.5.3.2 DOT试验67
1.5.3.3 数据分析7
1.5.4 总RNA提取和cDNA的合成、引物设计和半定量PCR操作7
1.5.4.1 总RNA提取和cDNA的合成7
1.5.4.2 引物设计78
1.5.4.3 半定量PCR操作8
1. *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
5.4.4 数据分析8
2 结果与分析813
2.1双酚A处理对蛋重胚重和蛋胚比的影响89
2.2双酚A处理对鸡卵巢外部形态的作用9
2.3双酚A处理对鸡卵巢内部结构的影响910
2.4双酚A处理对DNA甲基化的影响1112
2.5双酚A处理对鸡原始卵泡形成发育相关基因表达的影响1112
3讨论1213
致谢13
参考文献1314
图1蛋重、胚重及蛋胚比的变化折线图8
图2卵巢组织外部形态图8
图3卵巢皮质厚度图示9
图4卵巢皮质厚度对比图9
图5原始卵泡腔图示10
图6卵巢组织DNA甲基化变化图11
图7电泳条带对比图12
表1半定量PCR引物序列表78
双酚A对鸡原始卵泡形成的作用
引言
引言：卵泡发育是一个复杂的生理过程，包含多个阶段。在人的卵巢中，卵泡发生分为以下几个阶段：原始生殖细胞发育成为卵原细胞，再经过有丝分裂增殖成为初级卵母细胞，初级卵母细胞第一次减数分裂停留在核网期，外围单层颗粒细胞成为原始卵泡[1]，随后前卵泡膜细胞被募集到原始卵泡周围，原始卵泡开始转化成为初级卵泡[11]。雌鸡孵化至6.5天，左右侧生殖嵴发育不再对称，右侧生殖嵴逐渐退化，而左侧生殖嵴继续发育，最终成为卵巢组织[14]。卵泡是雌鸡基本的生殖功能单位，而卵泡储存的唯一形式就是原始卵泡，原始卵泡储存大量的卵母细胞同时产生生殖相关的激素[12]。与人类相似，鸡的卵母细胞进入减数分裂阶段后会被颗粒细胞包裹，形成卵母细胞合胞体［15］。第一次减数分裂结束，卵母细胞合胞体开始分离，卵母细胞周围逐渐包裹起前颗粒细胞，形成原始卵泡，众多的原始卵泡构成原始卵泡池即原始卵泡库［12］。原始卵泡库的建立是不可逆的，也就意味着原始卵泡库建立完成后便不再更新。原始卵泡库中的多数卵泡一直处于静止状态，只有少量（＜0.1％）的原始卵泡能够发育成为成熟卵泡［16］。
影响原始卵泡形成的因素非常多，如环境和生理状态等都会对原始卵泡的形成和发育造成或多或少的干预，进而影响雌性的生殖功能。据有关报道，原始卵泡的形成受局部产生的生长因子协调控制，而这些生长因子很大可能是其自身产生的类固醇[1]。目前研究有发现胰岛素、己稀雌酷等有机化学物质对原始卵泡的形成、激活和发育等阶段产生重要作用［6，10］。近年来，关于环境雌激素（EEs）对动物体生殖危害的报道很多[2]。环境雌激素一般是指和雌激素有着相似的化学结构并具有微雌激素活性，在体内产生类似雌激素作用的化学物质，因其主要对机体内分泌系统产生影响，因此也被叫做环境内分泌干扰物（EEDs）[4]。环境雌激素一旦进入体内，便会干扰机体正常的内分泌功能，如内分泌物质的合成、释放、运输及代谢等，进而破坏维持机体正常运作的功能物质，因此环境雌激素已经被视为第三类环境问题［2］，引起人们的极大重视。
环境雌激素中的一种典型代表—双酚A（bisphenolA，BPA）来源广泛、潜伏期长，对人们危害极大[3]，一直以来都是科研工作者研究的热点。双酚A主要产生于塑料制品的加工过程中，伴着塑料的老化、加热和酸接触，从聚合物中分离出来，并由食物链进入到动物体内，也有研究显示双酚A还可以通过呼吸道进人动物体内[3，7]。双酚A具有显著的生殖毒性，可以影响生殖系统和神经系统的发育，主要在胚胎期作用显著，而且具有明显的传代效应[4]，其主要会引起生殖器官、生殖机能和生殖行为等的异常。另有研究显示，双酚A暴露可致儿童性早熟，这是因为处于发育阶段的个体对其敏感度极高，很低的剂量就可导致持久的危害[5]。双酚A的作用范围广泛，作用机制多样。目前研究发现，双酚A能与雌激素受体互作、拮抗雄激素受体并影响体内的酶功能，干扰激素在体内的正常作用，影响机体正常的的生殖、免疫等活动[3]。有研究称，双酚A可能通过影响颗粒细胞生成雌激素的功能，进一步影响卵泡正常的生长和发育，进而抑制大鼠卵泡的正常生长和卵母细胞的成熟分裂[7]。另有研究表明，EEDs可作用于表观修饰必须的关键酶，改变相关基因的表观修饰程度，以致永久影响神经相关基因的DNA甲基化水平和表达量，进而导致生殖系统的早衰[18]。

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/562365.html