随着国内畜牧业的发展水平不断提高，养殖场的集约化程度也在逐渐提高，在提高经济效益的同时，畜禽因养殖环境较为封闭而出现热应激情况的可能性逐年增高。研究表明热应激可导致家畜机体脂代谢紊乱。本文旨在探究辣椒素对热应激小鼠肝脏脂代谢的影响。试验采用2×2双因子设计，因素1为是否热应激处理，因素2为日粮中是否包含辣椒素，24只小鼠被随机分成四个处理组，分别为溶剂对照组（NT-CON）、辣椒素组（NT-CSC）、热应激组（HT-CON）和辣椒素+热应激组（HT-CSC）。每组6只小鼠。结果表明HT-CSC组的肝脏谷丙转氨酶含量显著高于HT-CON，其总胆固醇含量显著低于其他组。NT-CSC的SCD1的mRNA含量显著低于NT-CON组。温度能够显著增加FAS、ACCα、PPARα和SREBP1的基因表达，并且辣椒素处理能够缓解这些基因的上调。HT-CSC组的HSP90基因表达显著高于其他组。因此，日粮添加辣椒素能够通过上调HSP90、下调脂肪酸合成相关基因的表达来缓解因热应激导致的小鼠肝脏脂代谢紊乱。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 试剂 2
1.2 试验动物 3
1.3 仪器 3
1.4 试验方法 3
1.4.1动物分组与饲养管理3
1.4.2样本采集3
1.4.3血清脂代谢生化指标的测定3
1.4.4肝脏生化指标和酶活的测定4
2 结果与分析4
2.1日粮添加辣椒素对热应激小鼠血清脂代谢相关指标4
2.2日粮添加辣椒素对热应激小鼠肝脏脂代谢相关生化指标的影响4
2.3日粮添加辣椒素对热应激小鼠肝脏脂蛋白脂肪酶活性的影响5
2.4日粮添加辣椒素对热应激小鼠肝脏脂代谢相关基因表达的影响5
2.5 日粮添加辣椒素对热应激小鼠肝脏HSP90基因表达的影响6
3 讨论 6
致谢8
参考文献8
辣椒素对热应激小鼠肝脏脂代谢的影响
引言
引言
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随着国内畜牧业生产规模化、集约化程度逐渐提高，以及全球气候变暖，畜禽在夏季容易遭受热应激。以容易受到热应激影响的家鸡养殖业为例，进入盛夏季节后，外界温度普遍在35 ℃以上，湿度较大，如果养殖户没有采取有效措施做好相应的防暑降温工作，会导致舍内的温度比室外温度高，对鸡群的健康生长产生严重威胁[1]，降低养殖户经济收益，给养殖场带来经济损失。热应激会引起动物机体内生理、生化代谢出现异常，会造成机体脂代谢紊乱。对于处在热应激状态下的生长猪，其血浆中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量显著升高[2]。在高温环境下，蛋鸡血浆中超氧化物歧化酶活力和还原型谷胱甘肽含量显著降低，甘油三酯和总胆固醇含量显著升高；另外,热应激使蛋鸡血浆中肿瘤坏死因子a、皮质醇、内毒素以及热应激蛋白70含量显著升高[3]。肉鸡由于采食中枢受到部分程度的来自热应激的抑制作用，采食量会有所下降，同时还会出现呼吸急促，心律上升，体表肌肉等处血液循环增加而导致消化系统供血不足[4]。肉兔受到热应激影响后表现为直肠温度、耳根温度、颈部温度、尾根温度及呼吸频率升高,内分泌系统紊乱,抗氧化能力降低等[5]。
通过营养调控手段来缓解热应激对动物机体所造成的损害备受畜牧行业者关注。近年来，一些养殖企业为追求产出和利润而在动物上滥用抗生素，从而造成细菌耐药性产生和食品安全问题。随着畜牧生产水平的提高，抗生素以及部分促生长剂已被我国逐渐禁用。因此，在倡导生态环保制度下探寻绿色天然的饲料添加剂代替抗生素已经成为必然趋势。
辣椒素是辣椒的主要活性成分。近年来研究发现，辣椒具有抗氧化、抗疲劳、镇痛、防止动脉粥样硬化、抗癌等功效，被广泛应用于医药。除此之外,动物学家发现辣椒及其提取物具有提高动物肤色、增强抗病力、 提高饲料报酬、减少热应激等作用[5]。同时，辣椒素提取技术相对成熟，符合国家关于饲料添加剂的相关政策和标准要求。有研究显示辣椒素可以增加食欲、振奋精神、促进血液循环、强胃健脾、驱寒除湿和活血消肿[6]，同时具有明显的抑菌和改善生产性能、调节肠道菌群、提高免疫力的作用。同时日粮内添加辣椒素能够有效缓解高脂饮食引起的大鼠腹股沟白色脂肪组织肥大和肝部脂肪变性[7]，能延缓大鼠的体质量增加，降低大鼠的血脂和肝脂水平，减轻大鼠的脂肪肝症状，对胆固醇代谢循环有较好效果，且不影响大鼠肝脏的正常发育[8]。这表明了辣椒素对于机体脂代谢具有积极调控作用[9]。同时，辣椒素对因雌激素缺乏引起高脂血症雌性大鼠也具有较好的降血脂、降肝脂作用[10]。此外，对辣椒素敏感的神经元在接受辣椒素刺激时可通过影响大脑中的神经元的可塑性使得神经元免受因应激所引发的机械性痛觉[11]，从神经方面证明辣椒素可缓解因应激所导致的不良反应。此外，在畜牧养殖应用上，辣椒素具有替代抗生素的潜在价值[12]。刘佳等人的研究发现在家鸡饲料中添加适量辣椒素能够显著提高盲肠固有层和上皮细胞的厚度，并且可以提高鸡抵抗肠道沙门氏菌侵入的能力，起到提高免疫力的作用[13]。
基于以上研究背景，本文探究辣椒素对热应激小鼠肝脏脂代谢的影响，旨在为辣椒素在生产上的应用提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 试剂
血清高密度脂蛋白胆固醇（high density liptein cholesterol，HDLC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein chesterol，LDLC）、甘油三酯（triglyceride，TG）和总胆固醇（total cholesterol , TC）等指标均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。RNA 提取试剂、反转录试剂盒和相对定量试剂盒均购买于南京诺唯赞生物科技有限公司。
1．2 试验动物
雄性C57BL/6J小鼠24只，6周龄，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。
1．3 仪器
HH－4水浴锅，常州国华电器有限公司；ACS（系列）电子秤，永州衡器有限公司；Model PRO 200 double insulated匀浆机，美国ProScience 公司; 酶标仪（瑞士Tecan公司）; ND 2000 微量紫外分光光度计和QuantStudio® 5 RealTime PCR 仪，美国Thermo Fisher Scientific 公司。
1．4 试验方法
1.4.1动物分组与饲养管理 本试验选取健康6周龄C57BL/6J小鼠24只，将其分为四个组：溶剂对照组（NTCON）、辣椒素组（NTCSC）、热应激组（HTCON）和辣椒素+热应激组（HTCSC）。其中辣椒素用食用油溶解。小鼠适应一周后，辣椒素和辣椒素+热应激组每天早上9：00灌胃0.4 mg 辣椒素，溶剂对照组和热应激组灌服等体积的食用油，试验一共处理15天。在试验的后6天对热应激和辣椒素+热应激组进行热应激处理，具体操作为中午11：00下午1：00对小鼠进行39 ± 0.5 ℃热应激2 h，一共热应激6天。所有试验小鼠饲养在大学动物实验中心内，按照自由采食和饮水的模式饲养。饲养环境为SPF级动物饲养环境。

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