目录
摘要 1
关键词 1
ABSTRACT 1
KEY WORDS 1
引言 1
1 研究背景 1
1.1热应激反应的发生机制 1
1.2 GR在热应激反应中的作用 1
1.3 GR对HPA轴的调控 2
1.4 GR对肝脏代谢的影响 2
1.5热习服（Thermal Acclimation ）.........................................................................................2
1.6 热习服的机理 3
1.7 早期热习服对肉鸡的影响 3
1.7.1 热习服对肉鸡体温的影响 3
1.7.2 热习服对肉鸡生长后期的影响 4
1.7.3 早期热习服对肉鸡内分泌激素的影响 4
1.7.4 早期热习服对肉鸡免疫能力的影响 4
1.8 热习服研究中目前存在的问题 5
2 材料与方法 6
2.1材料 6
2.1.1 试验动物及样品采集 6
2.1.2孵化收集鸡蛋 6
2.1.3胚胎期热处理 7
2.1.4 采样 7
2.2 实验仪器 7
2.3 肝脏组织的mRNA提取 7
2.3.1提取RNA所需材料 7
2.3.2研磨 7
2.3.3离心取上清液 8
2.3.4 分离RNA 8
2.3.5洗涤 8
2.4反转录 9
2.5蛋白免疫印迹（Western Blot） 9
2.5.1 WB实验所需材料 9
2.5.2肝脏组织中蛋白提取工作 10
2.5.3样品的前处理工作 10
2.5.4 SDSPAGE电泳和转印工作 10
2.5.5蛋白转印工作 11
2.5.6封闭及抗体杂交 11
2.5.7发光及图像采集工作 11 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 

3 结果与分析 12
3.1 实验结果 12
3.1.1 胚胎鸡肝脏HSP70 m RNA表达 12
3.1.2 胚胎鸡肝脏HSP90 mRNA表达 12
3.1.3 胚胎鸡肝脏GR mRNA表达 13
3.1.4 蛋白免疫印迹结果 14
3.2 试验结果分析与讨论 15
致谢 17
参考文献： 18
胚胎期热习服对鸡胚肝脏组织GR表达影响
摘要
在肉鸡的规模化养殖过程中，脂肪肝是最为常见的营养代谢性疾病，给养殖业带来较为严重的经济损失。禽类脂肪肝的发病机制多样，其中，热应激是脂肪肝发生的重要诱因。在热应激发生时，糖皮质激素受体（GR）一方面可通过负反馈机制作用于HPA轴从而调控糖皮质激素（GC）的表达，提高机体抵抗力；另一方面肝脏中的GR可调控脂代谢相关基因从而调控脂肪肝。胚胎热习服是指将鸡胚置于一定时间段的高温环境，以期成年后抗热应激的能力增强。有大量研究证明，早期热习服可以有效提高肉鸡生长过程中对热环境的耐受性，但其是否通过调控肝脏GR表达来实现尚不清楚。本试验针对这一情况，对雪山黄鸡鸡胚进行早期热习服处理，采集肝脏样品进行检测。结果显示，热习服处理后鸡胚肝脏GR及其分子伴侣热休克蛋白HSP70和HSP90的mRNA表达与对照组相比无显著差异；GR蛋白表达与对照组相比也无明显差异。因此可以推测，早期热习服处理雪山黄鸡鸡胚对肝脏组织中GR表达量无显著影响。胚胎热习服处理对成年鸡GR表达及脂肪肝的影响还需进一步的研究。
引言
热应激对肉鸡养殖行业带来严重的损失，而实验研究发现早期对肉鸡进行热习服处理可有效提高后期肉鸡生长对高温带来热应激的热耐力[1]。机体在应激发生时一方面由下丘脑垂体肾上腺皮质轴(The hypothalamic–pituitary–adrenal axis ,HPA or HTPA axis)进行调节，而糖皮质激素受体（Glucocorticoid Receptor,GR）在HPA轴启动各方面都起到了至关重要的作用。另一方面肝脏中的GR可调控脂代谢相关基因从而调控脂肪肝。有学者研究证明GR不仅在下丘脑中有着极为丰富的数量，在肝脏等组织中也有分布。因此，研究热习服状态下肝脏组织中GR的表达，对热习服的研究有着很大的意义。
1 研究背景
1.1热应激反应的发生机制
热应激发生时，刺激下丘脑垂体肾上腺皮质轴(HPA轴)并使其产生反应，通过对血液中糖皮质激素（Glucocorticoid ,GC）的调节机制，以避免机体在不利环境遭受损伤。但同时高浓度糖皮质激素会使靶细胞的代谢出现异常，尤其是会造成淋巴细胞的溶解。糖皮质激素受体（GR）是GC作用时必要的受体，而热休克蛋白（heat shock protein，HSP）可以在靶细胞中能与GR结合形成复合物，维持受体的非活性形式，防止应激发生时高浓度的糖皮质激素产生破坏作用，以增强靶细胞在应激发生的抵抗力。

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