目录
摘 要 I
ABSTRACT II
第一章 文献综述 1
1 精氨酸 1
1.1 精氨酸的来源 1
1.2 精氨酸对动物精子活性的影响 1
2 活性氧 2
2.1 活性氧的来源 2
2.2 活性氧对精子的影响 2
3 一氧化氮 3
4 本研究的目的、意义以及创新之处 4
第二章 不同温度条件下精氨酸对猪精子活性氧和一氧化氮含量的影响 5
1 材料与方法 6
1.1 试验材料 6
1.2 试验设计 7
1.3 计算机辅助精子分析（CASA）测定 7
1.4 TAOC的测定 7
1.5 MDA的测定 7
1.6 NO的测定 8
1.7 数据分析 8
2 结果与分析 8
2.1 计算机辅助精子分析测定猪精子活性 8
2.2 L精氨酸在高温条件对猪精子TAOC的影响 10
2.3 L精氨酸在高温条件下对猪精液MDA的影响 10
2.4 L精氨酸在高温条件下对猪精液NO的影响 11
3 讨论 12
4 小结 14
第五章 结论与展望 15
参考文献 16
致 谢 19
不同温度条件下精氨酸对猪精子活性氧和一氧化氮含量的影响
摘 要
高温环境下公猪精液品质下降一直是困扰科研人员和养殖人员的一大难题。精子直线运动能力是成功完成精卵结合的重要保障，然而高温环境易导致精子运动能力下降，并影响到受精效果，因此本试验通过构建高温条件下的体外猪精子模型，来探讨不同孵育温度对精子运动能力的影响，并且通过添加精氨酸的方式来研究其对高温保存条件下精子的运动能力的影响机制。本试验取同一头公猪精液（活力>70%），随机分为4组，17℃、17℃+1.0 mM L精氨酸、39℃和39℃+1.0 mM L精氨酸，每组3个重复，分别置于17℃和39℃二氧化碳培养箱中孵育0、2和4小时，通过计算机辅助精子分析测定精子活力参数，对 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: #351916072# 
精液中总抗氧化能力 (TAOC)及丙二醛（MDA）含量检测以评估精子脂质过氧化程度，进而展现精氨酸对活性氧的影响并且对NO含量进行测定。结果发现：（1）猪精子在体外高温条件下保存时，其运动能力会降低。与39℃对照组相比，加入1.0 mM L精氨酸可以显著缓解高温处理后猪精子的运动活性。L精氨酸可显著维持体外培养猪精子活力和精子活率。（2）在17℃与39℃时，L精氨酸可对猪精子中的TAOC水平起到降低作用。（3）在高温（39℃）时，与对照组相比，加入1.0 mM L精氨酸可以显著降低猪精液中的MDA含量。表明L精氨酸可对精液中活性氧含量起到降低效果。（4）39 ℃环境温度下，精氨酸可有效减少精液稀释液中NO含量，减少精子氧化应激，表明L精氨酸具有保护精子膜功能和结构的作用。
引言
1.2 试验设计
取同一头公猪精液（活力>70%），随机分为4组，17℃、17℃+1.0 mM L精氨酸、39℃和39℃+1.0 mM L精氨酸，每组3个重复，分别置于17℃和39℃二氧化碳培养箱中孵育0、2和4小时，并测定精子运动性能。精液样品处理完毕后参照Ren等[28]报道的操作方法分离精清，并保存于20℃冰箱，测定精清TAOC，MDA和NO含量。
1.3计算机辅助精子分析（CASA）测定
用移液器移取新采集的精液10 μL，置于载玻片上，并加盖血盖片后，立即在200400倍显微镜下观察，载物台温度保持37℃，观察部位为血盖片中部，观察视野数不少于3个，通过电视录像系统在荧光屏上观察活力。利用电脑辅助精液分析系统在5min之内，分析新鲜精液中精子活力。精子活力按照运动的特点分为6个类型：精子活力、直线运动比例、静止比例、原地摆动比例、曲线运动比例和慢速运动比例。
1.4 TAOC的测定
猪精液中的TAOC由TAOC试剂盒测定（A015，南京建成生物工程研究所），单位为相对值。检测精子TAOC含量能直接反映精子消除活性氧的能力。机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系，该防御体系有酶促与非酶促两个体系，非酶促反应体系中主要为维生素、氨基酸和金属蛋白质，比如：维生素E、维生素C、色氨酸、组氨酸、转铁蛋白、乳铁蛋白等，酶促反应依赖酶的催化作用，许多酶是以微量元素为活性中心，如：超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等。这个体系的防护氧化作用主要通过消除自由基和活性氧以免引发脂质过氧化，保持机体正常活性氧水平，维持机体氧化还原平衡，TAOC不仅能反映精子消除过多活性氧能力，还间接反映了细胞最终活性氧的状态。
按照试剂盒操作步骤，将精清分别与应用液旋涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟，加反应液，混匀后，放置10min，波长520nm，1cm光径，双蒸水调零，测定吸光度值。
1.5 MDA的测定
猪精液中的MDA含量由MDA试剂盒测定（A003，南京建成生物工程研究所），测定数值单位nmol/mL。机体组织细胞收到氧化应激产生氧自由基，能攻击细胞生物膜（细胞膜和细胞器膜结构）中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物，主要是 MDA。MDA是一种常用的膜脂过氧化指标，能够间接反映组织细胞以及体液中氧化还原状态和活性氧水平。MDA在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5三甲基恶唑2，4二酮)，其最大吸收波长在532 nm。

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