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摘 要 Ⅰ
ABSTRACT Ⅱ
第一章 文献综述 1
1 胆碱的吸收代谢 1
1.1 胆碱的重要作用 1
1.2 瘤胃内胆碱的代谢 1
2 三甲胺的危害 2
3 抑制三甲胺危害的两条途径 3
3.1 通过甲烷菌利用三甲胺 3
3.2 制备过瘤胃胆碱 3
4 胆碱降解菌研究进展 4
5 研究目的与意义 5
第二章 奶牛瘤胃中三甲胺产生菌的分离培养 6
1 材料与方法 6
1.1 培养基成分及培养基的配置 6
1.2 接种物 8
1.3 三甲胺产生菌富集培养及分离纯化 8
1.4 DNA 提取 9
1.5 细菌的 PCR 扩增 9
1.6 cutC基因PCR扩增 9
1.7 三甲胺产生菌序列分析及进化树建立 10
1.8 气压、氢气和甲烷的测定 10
1.9 三甲胺的测定 10
1.10 数据统计 10
2 结果与分析 10
2.1 瘤胃微生物对胆碱的降解 10
2.2 胆碱降解菌的分离鉴定 12
3 讨论 13
第三章 结论与展望 15
1 结论 15
2 展望 15
参考文献 16
致 谢 19
奶牛瘤胃中三甲胺产生菌的分离培养
摘 要
奶牛饲粮中通常含有大量的菜籽粕、饼粕等原料，其中含有丰富的胆碱、甜菜碱等营养物质，这些营养物质对奶牛有着重要的生物学作用。但是，胆碱是三甲胺的前体物质之一，会在瘤胃微生物的作用下会分解产生三甲胺，三甲胺随血液进入肝脏被氧化成三甲胺 N 氧化物，是一种有害物质,可能导致动物动脉粥样硬化等。因此，胆碱的降解不仅是对营养物质的浪费，降解产生的有毒物质可能会危害动物健康。本研究旨在富集分离培养瘤胃三甲胺产生菌。本实验通过体外厌氧培养技术，富集纯化降解胆碱的三甲胺产生菌，通过16S rRNA基因测序对获得的菌株进行鉴 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: *351916072* 
定。富集培养过程中，评估瘤胃微生物降解胆碱的能力，试验设置试验组与对照组，试验组培养基中添加胆碱氯化28㎎/10mL，发酵72h，利用气相色谱仪检测0h、24h、48h、72h时的甲烷、氢气和发酵液中三甲胺浓度；在厌氧工作站中，利用平板涂布分离技术，分离获得3株潜在的三甲胺产生菌M1、M2、M3，M1与梭菌Haloimpatiens  lingqiaonensis strain ZCCMC3相似度最高（98.64％），M2与拟杆菌Bacteroides pyogenes strain DSM 20611 相似度最高（99.57％），M3与极小链球菌Atopobium parvulum DSM 20469相似度最高（94.28％）。结论：奶牛瘤胃菌群具有较强的胆碱降解生成三甲胺的能力；获得了三株潜在的三甲胺产生菌。
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