目录
摘要4
关键词4
Abstract4
Keywords4
引言5
1 材料与方法6
1.1 试验材料 6
1.2 试验方法 6
1.2.1 通过萃取稀释的原理制备样品DNA稀释液6
1.2.2 目标位点引物设计6
1.2.3 验证目标位点引物并确定退火温度6
1.2.4 目的片段PCR扩增7
1.2.5 使用凝胶电泳法对PCR扩增产物进行检测7
1.2.6 目的DNA片段测序7
1.2.7 DNA测序结果与总产仔数关联分析7
2结果与分析8
2.1 测序结果8
2.2 结果分析8
2.3 SNP位点与产仔数关联分析结果8
3讨论 9
3.1 rs332069453位点对梅山猪产仔性状的影响 9
3.2 rs81447100位点对梅山猪产仔性状的影响 9
3.3 g.80866840位点对梅山猪产仔性状的影响 9
3.4 SNP影响性状差异可能存在的机理 10
3.4.1 编码区SNP改变基因编码区氨基酸序列 10
3.4.2 非编码区SNP影响基因转录表达10
3.5 保证影响产仔数的基因被成功挖掘的其他条件 10
4 总结 11
致谢11
参考文献12
附录 13
图1 凝胶检测7
表1 反应体系组成7
表2 基因分型结果8
表31 rs332069453位点与梅山猪总产仔数（TNB）关联性分析结果8
表32 rs332069453位点与梅山猪产活仔数（NBA）关联性分析结果8
表41 rs81447100位点与梅山猪总产仔数（TNB）关联性分析结果8
表42 rs81447100位点与梅山猪产活仔数（NBA）关联性分析结果9
表51 g.80866840位点与梅山猪总产仔数（TNB）关联性分析结果9< *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
br /> 表52 g.80866840位点与梅山猪产活仔数（NBA）关联性分析结果9
13号染色体上SNP位点rs332069453、rs81447100、g.80866840
多态性对梅山猪产仔性状的影响
引言
梅山猪是由大花脸猪演变而来的，是太湖流域著名地方猪种之一，有着高产仔、优肉质、耐粗饲等突出特性，尤其因为其产仔数高，享誉国内外，被国际畜牧界称为“世界级产仔冠军”。随着国家经济以及社会发展，人们生活水平的提高，我国人民对于猪肉的需求量增加，传统中国地方猪，包括梅山猪在内由于低的生长性能，无法满足我国人民对于猪肉的需求逐渐被淘汰，这导致梅山猪养殖的数量下降，险些流失了该优质种质资源。据此，国内开始越来越关注梅山猪的保种，同时对于梅山猪高产仔性能的研究热度逐渐增高，对于其高产的机理研究也越发深入。
国内地方猪种多有着性成熟早、抗逆性强、肉质优良等种质特点，但往往增重慢、生产周期长、瘦肉率较低；而国外猪种多生长快、出栏时间短、屠宰率高、瘦肉率高，但其易应激，产仔性能不突出。郭晓令等人[1]发现，母猪繁殖力高低主要取决于母猪本身遗传基础，即带高产基因的会表现出高产，而与配公猪以及后代个体基因对繁殖力的影响很小。从20世纪80年代起，美、英、法、日等国先后引进梅山猪种，后续便使用梅山母猪与国外猪种进行了一些杂交改良，其杂交后代都表现出了明显的杂种优势，产仔数均多于纯种国外猪种，说明梅山猪具有高产基因。鉴别这些候选基因，并将这些基因结合分子选育技术运用到实际生产中，将对稳定或提升梅山猪乃至其它猪种的产仔性能产生积极影响。
对于高产基因的鉴别，主要采用候选基因法和QTL定位法等方法。QTL定位即为确定产仔数相关的数量基因或基因座在基因组中的位置（QTL）。定位QTL则需要使用遗传标记，即通过了解遗传标记和目标数量性状之间的联系，将一个或多个QTL定位到同一染色体的遗传标记旁。而对于数量性状基因的鉴别，多用到候选基因法。候选基因法即假设所选标记或基因本身就是影响性状的主基因。
已有相关实验室利用QTL定位法和候选基因法鉴别到了影响梅山猪高产的SNP位点或者基因。赵要风、陈克飞等研究证实ESR基因和FSHβ是控制梅山猪产仔性状的主要基因[24]。张似青等人的研究[5]表明，梅山猪群体中即使有ESR主效基因，由于遗传力低，频率不会很高，有必要借助分子遗传学的方法对高产仔基因进行研究。随着分子育种的研究发展，吴井生等[6]发现FSHR基因第1外显子P1和P3位点的A和D等位基因对小梅山猪产仔数有明显影响；赵西彪等指出ESR、FSHβ两个基因对梅山母猪产仔性能均有显著影响，且B等位基因均为增加产仔数的基因[7]。
由国际猪QTL数据库(http://www.animalgenome.org/cgibin/QTLdb/SS/index）可知，目前已成功定位直接与产仔数相关的QTL 964个，且在众多已鉴别的QTL中，与太湖流域地方猪种产仔数相关的QTL主要定位于6、7、8、12、13、15和18号染色体。由于QTL定位解析的分辨率不高，目前尚未有研究小组成功鉴定到这些染色体上影响产仔数变异的主效基因或因果突变位点。本人导师实验室在此基础上，先是对与梅山猪血缘性状相近的313头二花脸猪产仔数据跟踪记录和分析，通过对其总产仔数EBV育种值估计、利用猪60K芯片进行分型，基于全基因组关联分析（GWAS）发现猪13号染色体上rs81447100显著影响二花脸猪的产仔数。最后通过增加标记进行QTL精确定位，发现了rs332069453、rs81447100、g.80866840三个位点在313头二花脸猪中与总产仔数和产活仔数关联显著。鉴于梅山猪与二花脸猪血缘的相近性，且都具有高产性能，于是本试验便探究这三个位点与梅山猪的产仔性能是否存在影响。本试验采集了151头纯种梅山母猪的耳组织样品，提取耳组织样DNA，对提取DNA样本进行PCR反应和DNA测序分型，并用SAS软件进行关联性分析，以期探究rs332069453、rs81447100、g.80866840这三个位点不同基因型与梅山母猪产仔性能的关联程度，为稳定或提升梅山猪产仔性能及生产力提供积极的选育意见。

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