水稀释法制备卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎与效价检测
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 种毒繁殖2
1.1.1 毒株与动物材料2
1.1.2 主要试剂及仪器2
1.1.3 接种前准备2
1.1.4 接种2
1.1.5 孵育和观察2
1.1.6 收获2
1.1.7 病毒含量测定试验2
1.2 鸭病毒性肝炎油佐剂灭活苗制备2
1.2.1 主要试剂及仪器2
1.2.2 制油相2
1.2.3 制水相3
1.2.4 乳化3
1.2.5 无菌检验3
1.2.6 安全试验3
1.3 疫苗免疫3
1.3.1 疫苗与实验动物3
1.3.2 主要试剂及仪器3
1.3.3 免疫程序3
1.3.4 病毒中和试验3
1.4 卵黄抗体制备3
1.4.1 试验材料3
1.4.2 主要试剂及仪器3
1.4.3 制备方法3
1.5 卵黄抗体效价检测3
1.5.1 试验材料3
1.5.2 主要试剂及仪器3
1.5.3 抗体中和试验3
1.5.4 无菌检验3
1.5.5 安全试验4
2 结果与分析4
2.1 种毒繁殖4
2.1.1 孵育和观察4
2.1.2 病毒含量测定试验4 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072*
2.2 鸭病毒性肝炎油佐剂灭活苗制备4
2.2.1 无菌检验4
2.2.2 安全试验4
2.3 疫苗免疫4
2.3.1 病毒中和试验4
2.4 卵黄抗体效价检测4
2.4.1 抗体中和试验4
2.4.2 无菌检验5
2.4.3 安全试验5
3 讨论5
3.1 卵黄抗体产生机理与免疫程序5
3.2 卵黄抗体与哺乳动物抗体的比较5
3.3 卵黄抗体提纯方法讨论5
3.4 卵黄抗体应用现状6
致谢6
参考文献7
水稀释法制备卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎与效价检测
引言
病毒分类学中，2011年国际病毒分类委员会（ICTV）第九次报告对鸭肝炎病毒的归属与分类进行修订[1]，目前该病毒包括三个血清型,分别为甲型鸭肝炎病毒（DHAV），鸭星状病毒1型（DAstV1），鸭星状病毒2型（DAstV2）[2]。在我国，鸭病毒性肝炎是指小RNA病毒科禽肝炎病毒属（Avihepatovirus）的甲型鸭肝炎病毒（duck hepatitis A virus，DHAV）[3]感染易感动物后引起的一种高传染性，高致死率的急性传染病。病程初期，病鸭精神沉郁、食欲下降、缩颈、眼半闭，常昏睡。病程中后期，运动失调、站立不稳、瘫向一侧、全身性抽搐等神经症状很快出现，随后在抽搐中死亡。死时呈角弓反张，俗称“背脖病”。 部分急性发病的雏鸭则突然倒地死亡，无任何症状。自然条件下感染后病鸭多为次日死亡，34天可全部死亡[4]。
临床实践中，为了将鸭病毒性肝炎带来的损害降到最低，已综合应用多种预防治疗手段，其中，精制卵黄抗体作为天然生物制品，来源安全，功能多样，制备便捷，得到广泛使用。卵黄抗体（yolk antibody）即只存在于禽类卵黄中的一种特异性免疫球蛋白——IgY，溶于水，故制备卵黄抗体的关键步骤在于卵黄中脂类与水溶性成分的分离及后续的纯化过程。本试验从免疫原制备开始，完整进行了一套针对鸭病毒性肝炎的卵黄抗体制备流程，以水稀释法分离得到粗制卵黄抗体后，进一步过滤，离心，抽滤，最终得到浓缩成品，并按规定对其进行了质量检测。
越来越规模化的禽类养殖业迫切需要经济有效的商业化成品来最大程度减小包括鸭病毒性肝炎在内的一系列禽类传染病的爆发，就目前的研究与实践而言，水稀释法分离除去脂类物质不影响抗体活性，与脂蛋白凝聚剂法相比，抗体回收率高；与有机溶剂法相比，所使用的试剂无毒无害，该法关键在于选择适当的稀释倍数，在回收率与提取工作量之间做好权衡。
1 材料与方法
1．1 种毒繁殖
1．1．1 毒株与动物材料 所用毒种为DHAV A66株，江苏省农科院保存。所用鸡胚为910日龄SPF鸡胚，购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。
1．1．2 主要试剂及仪器 灭菌生理盐水：准确称取0.9 g氯化钠于100 ml蒸馈水中溶解,121℃高压灭菌15 min。碘液，75%酒精，双抗溶液：（青霉素100 μg/mL、链霉素100 μg/mL），石蜡。超净工作台，恒温培养箱，组织捣碎机，普通离心机，20℃冰箱，检卵灯，微量移液枪。
1．1．3 接种前准备 用检卵灯对鸡胚进行照蛋，以铅笔勾划出气室分界，于气室稍下方胚胎活跃而血管明显的区域中，在血管之间的空隙划一标记，作为接种部位；用碘液涂抹注射部位蛋壳对其消毒，再以75%酒精对接种部位进行消毒脱碘，用灭菌钢针于标记处打孔，气室向上竖放于蛋架上。
1．1．4 接种 取生产用DHAV毒种，用灭菌生理盐水作1:100稀释。尿囊腔内接种910日龄SPF鸡胚60只，每胚0.2 mL，接种后以石蜡密封针孔。置37℃继续孵育，不翻蛋。
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