白首乌是植物牛皮消的块根，是中国传统的食药用植物。白首乌多糖是白首乌的重要成分之一，具有免疫调节、抗氧化等药理活性。本实验采用热水直接浸提法从白首乌的干燥根中提取白首乌粗多糖，再采用三氯乙酸法去除蛋白获得纯化的白首乌多糖，并采用MTT法研究其对鸡免疫细胞增殖的影响，探究其免疫活性。研究表明，采用本实验方法获得的白首乌多糖的提取率为9.8%，低浓度白首乌多糖体外对鸡外周血淋巴细胞增殖有显著促进作用。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Key words 3
1 材料与方法 4
1.1材料与试剂 4
1.1.1材料 4
1.1.2试剂 4
1.2 仪器与设备 4
1.3方法 4
1.3.1白首乌总多糖的提取 4
1.3.2白首乌多糖的纯化 5
1.3.3 白首乌分级纯化多糖的蛋白含量检测 5
1.3.4 白首乌总多糖的含量测定 6
1.3.5白首乌多糖的体外免疫增强活性研究 7
2 结果与分析 9
2．1 白首乌多糖提取率 9
2．2 细胞试验 9
2．2．1 白首乌多糖对T淋巴细胞增殖的影响 9
2．2．2 白首乌多糖对B淋巴细胞增殖的影响 9
2．2．3 白首乌多糖对前体树突状细胞增殖的影响 10
3 讨论 10
3．1 白首乌多糖的提取 10
3．2 白首乌多糖的免疫活性 11
3．3 白首乌多糖的应用前景 12
致谢 12
参考文献： 12
白首乌多糖的提取纯化及其对鸡免疫细胞增殖的影响
引言
白首乌是植物泰山白首乌（Cynanchum bungei Decne.）、耳叶牛皮消（Cynanchum auriculatum Royle ex Wight.）或隔山消（Cynanchum wilfordii (Maxim.) Hemsl.）的地下块根。白首乌味甘，性微温，味微苦，具有消食健脾、补肝益肾、益精补血、 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
强筋壮骨、疗疮解毒等一系列功效[1]，是我国传统的补益类中药材，也具有良好的食用价值。根块中不仅含有丰富的钙、铁、蛋白、脂肪、氨基酸等营养成分，还含有C21甾体、多糖、苯酮类、卵磷脂等活性成分[1]，其中白首乌多糖是其重要的有药理活性的化学成分之一，能参与到机体中细胞的各种新陈代谢和生命活动，具有多种生物活性，如抗氧化[2]、抗肿瘤[2]、免疫促进[3]、抑制络氨酸酶[4]、保肝[5]等。虽然白首乌多糖的免疫促进作用已有报道，但上述研究存在研究手段单一、方法简单、深度不够等问题，仍然有值得深入研究的价值。为了进一步研究白首乌去蛋白总多糖的免疫调节作用，本实验参考高丽君[6]等人的提取方法并且改进了白首乌多糖的提取和测定方法，并以B淋巴细胞、T淋巴细胞和树突状细胞为靶细胞，探究白首乌去蛋白分级醇沉多糖对上述细胞的体外增殖作用，以期进一步揭示白首乌多糖对机体免疫调节的影响。
1 材料与方法
1.1材料与试剂
1.1.1材料
50mL离心管； 500mL锥形瓶； 10mL、25mL、50mL、100mL、250mL、1000mL容量瓶；1mL、2.5mL、10mL注射器；96孔细胞培养板；移液器；移液管；1000mL圆底烧瓶；胶头滴管；玻璃棒；布氏漏斗；透析袋；手术剪；1000mL烧杯；眼科剪；静脉采血器；6孔细胞培养板；酒精灯；钢筛；研磨棒；球形冷凝管；铁架台；保鲜膜；橡皮筋；小青瓶；乳胶手套；脱脂棉等。
1.1.2试剂
α淀粉酶；糖化酶；无水乙醇；苯酚；三氯乙酸；盐酸；Hank’s液；氯化钠；碳酸氢钠；淋巴细胞分离液；磷酸氢二钠；氯化钾；MTT；无水乙醇；二甲基亚砜等。
1.2 仪器与设备
FD1D80真空冷冻干燥机，北京博医康实验仪器有限公司；FE20 pH计，瑞士梅特勒托利多仪器公司；DKS26电热恒温控制水浴锅，宁波市江南仪器厂；IKA型调温控制电热套，山东省鄄城晨博实验设备仪器有限公司；H25000R2高速冷冻离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；洁净工作台，东莞雅宁净化科技有限公司；二氧化碳培养箱，上海三腾仪器有限公司；UNICO紫外可见分光光度计 ，尤尼柯上海仪器有限公司；
1.3方法
1.3.1白首乌总多糖的提取
1.3.1.1药材的前处理
取新鲜的白首乌块根，洗净，置于烘箱中烘干，粉碎机中粉碎，无水乙醇浸泡过夜，加热回流脱脂1.5h，离心去除乙醇溶液，残渣置于烘箱彻底烘干，干粉保存备用。
1.3.1.2水浴浸提
取脱脂后的白首乌干粉，称重，置于不锈钢锅中，加入20倍量的去离子水，使用电磁炉小火保持锅内煮沸，后保持微沸提取2h，冷却至25℃，3000r/min离心10min，去除沉淀等杂质，上清液加热浓缩至每毫升相当于原药材1g，得白首乌粗多糖。
1.3.1.3复合酶法去淀粉[6]
在热水浸提过程中，部分可溶性淀粉随着多糖的浸提而被提取出来，因此需进一步用酶法去除其中含有的淀粉。按0.5g/100ml加入α淀粉酶到溶液中，用1%的盐酸调节pH至6，在温度85℃水浴条件下作用1.5h，取少量液体加入碘液检查至溶液不变色。然后按0.5g/100ml加入糖化酶，用1%的盐酸调节pH至6，在温度60℃水浴条件下作用1h。水解完成后，流水透析3d至溶液呈中性，浓缩，得白首乌总多糖。
1.3.1.4醇沉

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