目 录
1 引言1
1.1 牛至油简介1
1.2 植物精油的体外抑菌方法2
1.3 本论文研究方法及手段3
2 实验部分3
2.1 实验试剂及设备3
2.2 实验方案5
3 结果分析6
3.1 滤纸片法6
3.2 倍数稀释法测定MIC7
3.3 pH值对牛至油MIC测定的影响7
3.4 GC/MS分析8
结论10
致谢11
参考文献12
1 引言
近年来，伴随着我国国民经济的快速发展和人们生活水平的不断提高食品加工业也得到了很大的发展，然而在食品加工业中各类食品的防腐保鲜一直是一个亟待解决的重要问题。为了延长食品的保质期，在食品加工过程中，人们采用了许多不同的手段来杀死或者抑制微生物，添加防腐剂是其中最方便而有效的一种方法，因而被广泛使用于食品加工行业中。这使得食品添加剂行业得到了蓬勃发展，但在发展的同时也出现了不少问题，以至于有部分人认为食品安全最大的问题是食品添加剂。为了让大家走出这一误区，我们就从食品防腐剂这个备受争议也是最敏感的食品添加剂来说起。
防腐剂包括天然防腐剂和化学防腐剂[1]。天然防腐剂通常是从动物植物和微生物的代谢产物中提取的[2]，如：溶菌酶，鱼精蛋白、聚赖氨酸、壳聚糖、果胶分解物、蜂胶、琼脂低聚糖、茶多酚、植物提取物、微生物防腐剂、香精油。化学防腐剂又分为有机防腐剂与无机防腐剂，前者主要包括苯甲酸、山梨酸等，后者主要包括亚硫酸盐和亚硝酸盐等，长期或过量食用含有化学防腐剂的方便食品会对人体带来一定的危害,这与追求安全、健康饮食方式的愿望背道而驰。此外目前的化学防腐剂抗菌能 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^* 
力有限,使用范围有其局限性,因抗菌失效而导致食品变质的中毒事件时有发生。因此开发高效、安全、稳定的天然防腐剂已成为食品科学研究的热点之一。目前，逐步由无毒无害的天然食品防腐剂替代现有的化学防腐剂、由高价格的天然食品防腐剂向低价格、由单项防腐向广谱防腐方向发展开发更安全的新型防腐剂是大势所趋[3]。
1.1 牛至油简介
牛至油是从天然植物牛至中提取的含有效成分的挥发性油类。牛至油含有30种以上的活性化合物不但可以杀死真菌或阻止其生长，同时可以抑制多数细菌的生长其中以香芹酚和瑞草香酚功能最强大是一种强力的天然杀菌剂。牛至油不同于抗生素，不会让细菌产生抗药性[4]。除真菌外，牛至油强大的活性可以杀死大多数的致病菌，包括葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌等。研究还指出牛至油不但杀死真菌、酵母菌、细菌等，同时还可以杀死一些寄生虫和滤过性病毒。牛至油是强力抗氧化剂，同时还是一种强力止疼剂[5]，效果与吗啡相同，但不会上瘾，此外牛至油可以刺激胆汁分泌帮助消化。
由于牛至油具有独特的抗菌机理不产生抗药性与目前使用的抗生素和合成抗菌药无交叉抗药性等优点，是一种比较理想的饲用抗生素替代品，并已广泛应用于畜牧业。
1.2 植物精油的体外抑菌方法
抑菌实验用于测定抑菌剂在体外抑制微生物生长的效能。虽然已报道的抑菌方法有很多，但是由于操作中的影响因素很多(如植物的类型、精油提取方法的多样性、菌体的差异性、培养基的差异性及培养条件不同，等等)，因此现在还没有一个统一的实验操作标准。目前，精油体外抑菌的验证方法大体上分为琼脂扩散法和稀释法两种。
1.2.1 琼脂扩散法
琼脂扩散法是抑菌实验中最常用的方法。根据操作的不同又可分为滤纸片扩散法（图1）和琼脂杯扩散法（图2）。其中滤纸片扩散法更为常用，其操作是将浸泡过精油的滤纸片放置在涂过菌的琼脂平板表面，随后精油会由纸片中心向边缘扩散出浓度梯度，经过一段时间的培养后，通过测量抑菌圈直径的大小来评价抑菌效果。琼脂杯扩散法是把精油滴入到培养基预先打的孔里面，经培养后再进行抑菌圈直径的测量。
图1 滤纸片扩散法 图2 琼脂杯扩散法
影响琼脂扩散法实验结果的因素有很多[7]，比如滤纸片上精油的吸附体积、精油的挥发性以及是否使用乳化剂作为溶剂等。因此，琼脂扩散法只是初步筛选抑菌剂抑菌效果的过程，重复性不高，更为精确的定量分析还需要稀释法来测定。
1.2.2 稀释法
稀释法可分为琼脂稀释法和肉汤稀释法两种[8]，都能用于定量分析抑菌剂的抑菌效果。最小抑菌浓度是指能抑制细菌生长的抑菌剂的最低浓度，是定量分析植物精油抑菌效果的重要指标之一。
琼脂稀释法的特点是可以在同一平板上，同时测定多种菌株。肉汤稀释法是将液体培养基稀释药物成系列递减的浓度，每管加入一定量实验菌24-48小时后观察试管浑浊情况以获得实验数据的方法。又分为常量稀释法(试管稀释法)和微量稀释法(96孔板法)[9]，其判断结果的方法有肉眼观测法、分光光度计法及菌落计数法等。各种判断方法各有利弊:肉眼观测法非常简便，但不够精确;分光光度计法操作简单，但是测定的是总菌液浓度，而不是活菌浓度;菌落计数法测定结果精确，但是工作量大。
1.3 本论文 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^* 
研究方法及手段
本论文以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺菌为研究对象，考察牛至油的体外抑菌活性，并研究不同pH条件下牛至油的抑菌效果，初步探究其在食品防腐方面的应用价值。采用滤纸片法进行初筛，以抑菌圈为考察指标，初步判断牛至油对四种食源致病菌的敏感性[10]。再采用液体倍数稀释法测定各菌种的最低抑菌浓度（MIC）[11]，研究pH值对牛至油抑菌效果的影响。
2 实验部分
2.1 实验试剂及设备
2.1.1 实验材料及设备
实验材料见下表1，实验仪器与设备见表2，实验试剂见表3：
表1 实验材料
实验材料 来源
牛至油 吉安华美植物油提炼厂
大肠杆菌 淮安商品检验检疫中心
金黄色葡萄球菌 淮安商品检验检疫中心
沙门氏菌 淮安商品检验检疫中心
志贺菌 淮安商品检验检疫中心
表2 实验仪器与设备
仪器名称 规格 来源
气相色谱/质谱联用仪 5973N-6890GC 美国安捷伦公司
超声波清洗器 KQ-250E 昆山市超声仪器有限公司
生物洁净工作台 BCM-1000A 苏州安泰空气技术有限公司
高压灭菌锅 VW002 100L 河南新飞电器有限公司
电子分析天平 AUX220 日本岛津
组合式恒温振荡培养箱 HD-930 太仓市实验设备厂
酸度计 PHS-25型 上海仪电科学仪器股份有限公司
数显水浴恒温振荡器 SHY-2A 金坛市晶波实验仪器厂
移液枪 10～100 µL 美国fisher有限公司
电热恒温干燥箱 DHG-9246A 上海精宏实验设备有限公司
胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）：称取38.0 g于1 L蒸馏水中，121℃高压灭菌20 min，备用。
胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）：称取30.0 g于1 L蒸馏水中，121℃高压灭菌20 min，备用。

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/zygc/25221.html