摘 要复方是根据药性理论和病机，君臣佐使等原则配伍而成的药方，探究复方寒热药性的理论一直是中医药理论研究的难点和热点，解析复方寒热药性对复方的配伍，组成以及指导临床用药和应用都有着重要的指导意义。本文通过MTT法评价验证交泰丸的寒热属性，分析其细胞毒性作用，为中药复方寒热性研究提供参考依据。MTT法是一种细胞水平上的寒热药性评价方法，细胞为人体的基本单位，药物作用于人体有寒热反应，推测药物对细胞应该也会有类似的寒热反应。即在一定浓度范围内，热性复方会促进细胞生长代谢、增殖，寒性复方则会表现为抑制。交泰丸中黄连肉桂二药寒热相伍，体现清温并用之法，且交通心肾，对心肾不交之失眠有显著疗效。选其作为研究对象，通过MTT法探究交泰丸提取液对细胞体外增殖的影响，用倒置显微镜观察提取液对细胞形态特征的影响，论证其复方寒热药性。结果表明，交泰丸表现出寒凉药的特征，随着浓度5µg/ml-800µg/ml的增大，对Hela细胞及SGC-7901细胞的生长增殖表现出抑制的作用，且随着浓度的增大抑制作用越来越强。本实验可为此后复方寒热药性的研究提供实验依据和方法学参考。 目 录
1 绪论
1.1 研究背景 1
1.2 中药寒热药性研究概况 1
1.3 中药复方寒热药性研究方法 2
1.3.1 动物行为温度趋向学 2
1.3.2 生物热力学—微量量热法 2
1.3.3 MTT法 2
1.4 交泰丸研究概况 3
1.4.1 交泰丸的配伍理论研究 3
1.4.2 交泰丸的临床研究 3
1.4.3 交泰丸的药理研究 4
1.4.4 交泰丸中药物的研究进展 4
1.5 研究内容 5
2 实验部分
2.1 仪器与试药 6
2.1.1 实验仪器 6
2.1.2 药品与试剂 6
2.1.3 实验细胞 6
2.2 实验方法 6
2.2.1 药品的溶液的制备 6
2.2.2 细胞培养 6
2.2.3 MTT实验 7
2.2.4 实验数
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/> 2 实验部分
2.1 仪器与试药 6
2.1.1 实验仪器 6
2.1.2 药品与试剂 6
2.1.3 实验细胞 6
2.2 实验方法 6
2.2.1 药品的溶液的制备 6
2.2.2 细胞培养 6
2.2.3 MTT实验 7
2.2.4 实验数据分析 7
2.3 结果与讨论 7
2.3.1 对细胞体外生长增殖的影响 7
2.3.2 对Hela细胞形态的影响 9
2.3.3 对SGC7901细胞形态的影响 10
结论 11
参考文献 12
致谢 14
1 绪论
1.1 研究背景
复方是祖国传统医药学的组成部分，是中医临床治疗的手段和形式，近些年国家在中药复方这方面投入量与研究力量都大大增加[1]。中药复方体现了中医学的精华，是进一步可以开拓创新的中医学课题，是需要以创新的思路，方法和技术来进行全面研究的。寒热药性对决定复方的组成，具体配伍形式，临床结合病证用药及具体治法的应用都有重要的指导价值。因此，复方寒热药性研究在整个中医药现代化研究中意义重大。
1.2 中药寒热药性研究概况
中药药性是中医药理论中最重要的基本理论之一，是中医与中药之间的桥梁与韧带，是中药学形成于发展的重要基础。它是中医临床遣方用药和中药制药遵循的主要依据，为中医辨证论治提供了临床用药指导原则[2]。中药药性理论的萌芽时期是在春秋战国之前，它的初成时期较长，最有代表性的著作是《黄帝内经》。古代著名医家对中药药性的解释不仅从五运六气，生长环境的影响还从药物的形态颜色等各个方面进行阐述。它是中药理论长期发展及中医临床实践经验的总结。
中药寒热药性研究以20世纪60年代为时间间隔，大致可以分为两个阶段，即60年代以前的朴素研究阶段和60年代以后的现代科学研究阶段。60年代之前中药寒热药性的研究进展缓慢,人们只能根据直觉，直观判断进行研究,虽然在此阶段中积累了大量的临床经验,但由于缺乏自然科学的支持,使得中药寒热药性研究没有根本性的突破。60年代以来，随着科学技术在人类社会各个领域的广泛深入应用，中药寒热药性研究取得了很大的进展，对中药寒热药性的药理药效、物质基础等问题展开了一系列探讨和研究[3]。20世纪70、80年代兴起了中药药性研究的热潮，许多学者依托药理学实验研究了不同药性的中药，配伍、比例对药效的影响[4,5]。
中药寒热药性是中药药性理论的核心，古代中医世家陶弘景曾说过“药物甘苦之味可略,唯冷热须明”，可见寒热药性是中药的首要药性,其在中医药临床使用中尤为重要[6]。中药四气又称四性，就是寒、热、温、凉四种不同的药性。它不是指药物的温度，而是它的秉性。“寒凉”的药物，是指它能治热性病；“温热”的药物，是指它能治有冷的而表现的病。四气之中寓有阴阳含义，寒凉属阴，温热属阳，而寒与凉、温与热之间仅程度上的不同，大体上其实只有寒热两种药性[7]。
1.3 中药复方寒热药性研究方法
近来科学发展的迅速，为现代医学研究提供了有力的帮助，提供了新的方法和新的思路。复方寒热药性的研究主要有动物行为温度趋向学，生物热力学和MTT法等。
1.3.1 动物行为温度趋向学
动物行为学是生物学中非常重要并且极为活跃的一门学科，而温度趋向是指原始动物到哺乳动物都有一种特殊的趋向性，动物行为温度趋向学就是结合动物行为倾向选择最适宜的环境温度来进行生活[8]。科研工作者们就是根据这种机体对环境温度的趋向性来推测这有可能是寒热属性具体表征方式之一，认为药物本
身所蕴藏的能量或者热量物资在体内的正常转化有可能是药物本身所含的致热物质作用于机体产生的一种生理或病理反应，而这些反应都可以热变化和能量转移[9]。无论是哪种形式的转移和变化，都可使机体呈现寒与热的差异，从而表现为对寒热环境不同的趋向性。
1.3.2 生物热力学—微量量热法
微量量热法是一种基于生物热力学来表达寒热药性差异的一种评价方法。而生物热力学是热力学知识与生物学相结合而发展起来的，它是指利用热力学的基本原理来解释生命现象以及与生命现象有关的物理现象。在中医治则治法中曾经提到的“寒者热之，热者寒之”、“实者虚之，虚者实之”，以及中医药的天人合一整体观念，辨证论治，阴阳五行关系等都体现了热力学的第二定律[10,11]。
中药药性在热力学中可以认为是机体对物理热变化的一种生理或病理感受。一般来说，这种物理热变化是药物在体内代谢中所产生的中药与生物之间的相互作用，即表现为凡是使机体呈现亢奋，产生较多的能量的药为温热药；凡是使机体呈现抑制，释放消耗较多能量的药为寒凉药。寒、热、温、凉药性不仅是中药作用性质的概括，而且是物理热，热生物学，热化学的重要反映。
1.3.3 MTT法
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理
为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性
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