摘 要 本文采用果胶酶和纤维素酶复合法提取黄芪总黄酮，考察了乙醇浓度、混合酶的用量、酶解温度、pH这几个因素，在单因素试验的基础上，以黄芪总黄酮含量为指标，通过正交试验，优选出复合酶法提取黄芪总黄酮的方法。最后得到果胶酶和纤维素酶复合法提取黄芪总黄酮的最佳提取条件为：混合酶用量为6mg，酶解温度35℃，酶解时间90min，乙醇浓度90%，黄芪总黄酮的提取率为0.58%。目 录
1 概述
1.1 研究背景 1
1.2 研究目的意义 1
1.3 黄芪总黄酮的概述 1
1.3.2黄芪总黄酮的药理作用 2
1.4 总黄酮的提取方法 5
1.4.1乙醇回流提取法 5
1.4.2纤维素酶法提取 5
1.4.3酶解辅助乙醇提取 6
1.4.4超声波法提取 6
1.4.5超临界萃取法超临界 6
2 实验部分
2.1 实验材料与仪器 8
2.2 黄芪总黄酮含量的测定—紫外分光光度法 8
2.2.1测定方法 8
2.2.2芦丁对照品溶液的制备 8
2.2.3吸收波长的选择 8
2.2.4方法学考察 9
2.3 果胶酶纤维素酶提取黄芪总黄酮法 9
2.3.1实验流程 9
2.3.1黄芪总黄酮成分提取 9
2.3.2单因素试验的考察 10
2.4 纤维素果胶酶提取的正交试验 11
2.5 黄芪中总黄酮提取率的计算 11
3 试验结果与分析
3.1 标准曲线制备 12
3.2 单因素试验结果 12
3.2.2果胶酶和纤维素酶混合比例对总黄酮提取的影响 12
3.2.3混合酶用量对黄芪总黄酮提取的影响 13
3.2.4考察酶解时间对总黄酮提取率的影响 14
3.2.5酶解温度对黄芪总黄酮提取的影响 14
3.2.6乙醇浓度对黄芪总黄酮提取率的影响 15
3.3 正交试验设计结果与分析 16
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素试验结果 12
3.2.2果胶酶和纤维素酶混合比例对总黄酮提取的影响 12
3.2.3混合酶用量对黄芪总黄酮提取的影响 13
3.2.4考察酶解时间对总黄酮提取率的影响 14
3.2.5酶解温度对黄芪总黄酮提取的影响 14
3.2.6乙醇浓度对黄芪总黄酮提取率的影响 15
3.3 正交试验设计结果与分析 16
3.4 正交试验结果验证 17
3.5 总结 17
结论 19
参考文献 20
致谢 23
1 概述
1.1 研究背景
黄芪，是植物和中药材的统称，具有行气、固表、排脓、生肌的作用，其主要成分有黄酮、皂苷、氨基酸、多糖等[1]。目前对黄芪生物活性成分提取的研究多集中在多糖和皂苷的提取工艺方面，对黄芪黄酮提取工艺的研究较少。近年来，酶技术应用于中草药有效成分的分离提取取得了不少新的成果，应用纤维素酶可破坏细胞壁的致密结构，加速药用有效成分的溶出，提高药用有效成分的提取率。 因此酶提取是目前工业化生产应用较为广泛的一种提取方法，对黄芪黄酮的酶提取工艺进行研究具有重要的现实意义。
1.2 研究目的意义
黄芪是豆科植物蒙古黄芪或膜夹黄芪的生长干燥根，在医学里具有利尿托毒、敛疮生肌、固表补气、排脓等重大功效。黄芪提取的主要有效成分有皂苷、多糖和黄酮类化合物，其中黄酮类化合物主要包含毛蕊异黄酮及其糖苷芒柄花素和芒柄花苷等[2]。通过研究证实黄芪中的黄酮类成分具有很多种药理活性，具有抗病毒性、清除氧自由基性、抗脂质过氧化性、增加免疫力、以及促进细胞增殖的作用的性质[3,4]。
本实验将纤维素酶和果胶酶复合用于黄芪总黄酮的提取，应用正交设计优选酶法提取黄芪总黄酮的工艺条件，探讨各因素对黄芪总黄酮提取率的影响，以期达到高提取率、减少能耗、缩短提取时间和有效保存黄芪总黄酮的生物活性的目的，并为植物酶技术在黄芪有效成分的提取方面提供重要依据。
1.3 黄芪总黄酮的概述
黄芪（Astragalus）为豆科多年生草本植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，味甘、性微温，具有补气升阳、益卫固表、利尿脱毒、归脾、排脓、消肿、托疮生肌之功效，可煎服、生用或蜜炙用，为历代常用的补益中药。黄芪主要含有多糖、皂甙、黄酮、氨基酸及微量元素等有效成分。其中黄芪总黄酮为主要的有效成分，能提高机体的免疫功能，保护心血管系统，抗菌抗病毒和抗肿瘤等作用。鉴于黄芪总黄酮的多种生物活性，其已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一[6]。黄芪总黄酮来源于植物的叶子和果实中，大部分能与糖结合成苷类物质少数以配基的方式存在，还有少部分以游离形式存在。黄芪总黄酮中主要含有6种化合物，其中4种异黄酮类化合物为主要的化合物[5]。它们分别是：芒柄花素、β谷甾醇、毛蕊异黄酮、芒柄花素7OβD吡喃葡萄糖苷、毛蕊异黄酮7OβD吡喃葡萄糖苷和β谷甾醇3OβD葡萄糖苷。它们是以黄酮作为母核，同时黄酮母核上连有氢氧基、羟基等一系列取代基，都是植物经过光合作用产生的一大类天然化合物黄酮类化合物，大多数植物都可以合成黄酮类化合物，并且很多数以苷的形式存在着[7]。
1.3.2 黄芪总黄酮的药理作用
1.3.2.1 免疫调节作用
黄芪总黄酮可以使免疫细胞内CAMP升高，激活磷酸化酶，促进糖原分离，为吞噬细胞的免疫应答提供能能量，可以促进淋巴细胞的变化，使中性粒细胞的吞噬功能大大提高。在氢化可的松致免疫功能低下小鼠的体内，yt2(相当于人CD8+T细胞)、L3T4+/Lyt2+均明显降低，TFA选择性的提高CD4+TH1细胞，使以IFNγ为主的TH1细胞一直处于非常旺盛态，抑制了以IL4为主的TH2细胞的正常表达，能使得增体的细胞免疫功能增强，这一作用过程有很大可能是通过调节TH0过程中的细胞因子来得以实现的[8]。
1.3.2.2 抗突变作用
在体外培养的哺乳一类的动物细胞的基因发生突变和小鼠睾丸染色畸变试验是反映细胞的致癌物的敏感和机体接触致突变物的指标，还是我们现代公认的抗突变剂筛选最实用方法。在外体黄芪总黄酮能够显著降低丝裂霉素C诱导V79细胞内基因发生突变，实验表明黄芪总黄酮对化学物质诱导反应对细胞基因损伤有拮抗作用；体内试验表明黄芪总黄酮对环磷酰氨诱导的小鼠骨髓细胞微核有明显抑制，而微核发生的频率在一定程度上反映了细胞DNA受损情况，可以进一步证实TFA对化学物诱导的DNA损伤具有保护作用[9]。还在很多文件找到中抗突变判定标准，认为黄芪总黄酮具有抗突变作用。
1.3.2.3 抗肿瘤作用
在体内肿瘤细胞代谢会异常活跃，并且能够伴有很多自由基产生物[10]，但黄芪总黄酮
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