甘薯中去氢表雄酮的提取工艺及抗氧化活性研究(附件)
1 绪论
1.1甘薯与去氢表雄酮 1
1.2 DHEA的安全性 1
1.3 DHEA生理活性 2
1.3.1抗衰老作用 2
1.3.2抗冠状动脉病 2
1.3.3抗肿瘤 2
1.3.4对骨质影响 2
1.3.5调节记忆力 2
1.3.6抗骨关节炎 3
1.4DHEA的提取及分离纯化 3
1.4.1化学合成 3
1.4.2生物合成 3
1.4.3从天然产物中提取 3
1.5 超声提取法介绍 3
1.6 DHEA提纯及分析方法 4
1.6.1薄层色谱法(TLC) 4
1.6.2高效液相色谱法(HPLC) 4
1.7DHEA应用前景 4
1.7.1 辅助生育技术 4
1.7.2 改变中老年男性性激素水平 4
1.8小结 5
2 实验部分
2.1.材料、试剂及仪器 6
2.1.1 材料 6
2.1.2 试剂与试药 6
2.1.3 仪器 6
2.2甘薯中DHEA的提取方法实验及结果 7
2.2.1 提取方法 7
2.2.2 单因素实验 7
2.2.3 正交实验 11
2.3 DHEA 的定性、定量分析 12
2.3.1 薄层色谱法 1
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6
2.1.1 材料 6
2.1.2 试剂与试药 6
2.1.3 仪器 6
2.2甘薯中DHEA的提取方法实验及结果 7
2.2.1 提取方法 7
2.2.2 单因素实验 7
2.2.3 正交实验 11
2.3 DHEA 的定性、定量分析 12
2.3.1 薄层色谱法 12
2.3.2 高效液相色谱法 13
2.4 DHEA 的抗氧化活性测定 15
2.4.1实验方法 15
2.4.2 实验结果 15
3 结论与展望
3.1结论 17
3.2展望 17
参考文献 18
致 谢 20
1 绪论
1.1甘薯与去氢表雄酮
甘薯[1] (IponioeaBatatas)又叫红薯、地瓜,是一年蔓生草本植物,属根茎类旋花科,作为世界上最重要的粮食作物,它已被广泛关注,研究和加工技术研究价值的营养十分活跃;近年来,甘薯的生理活性也逐渐被科学家重视。
去氢表雄(甾)酮[2](Dehydroepiandrosterone,简称为DHEA),又名脱氢表雄酮,化学名称为3β羟基雄甾5烯17酮,其分子式是C19H28O2,分子量为288.41,熔点为151℃ 153℃,旋光度+5.5°,是一种保留胆固醇△5,6 双键及可酯化3β羟基甾体,是人体肾上腺皮质网状层分泌一种肾上腺激素前体物质,是制造甾体激素中间体,并参与合成肾上腺分泌多种激素;近年来,国内外的科学家对去氢表雄酮的生理活性研究拓展到了抗衰老、抗糖尿病,并取得了重大进展。
1.2 DHEA的安全性
目前关于去氢表雄酮的安全性[3]主要集中在两个方面:(1)去氢表雄酮在体内转化后对机体的分泌及代谢产生的影响;(2)潜在致癌性。
目前资料表明,在哺乳动物体内使用生理剂量以内的去氢表雄酮是安全的。有学者把不同剂量的去氢表雄酮掺入每公斤饲料中,让雌鼠进食25周后发现,乳腺癌被明显抑制了,且无副作用。另有学者对恒河猴也做了每天给予去氢表雄酮的实验,实验表明去氢表雄酮的摄入并未对实验动物产生不良影响。有人[3]总结,当每公斤饲料中有超过4000mg的去氢表雄酮时,可能对实验动物产生毒副作用,而生理剂量内则对实验动物产生生理功能的影响。
在人体试验表明,受试者没有产生任何不良反应。相反,大量服用DHEA的受试者显著调整了身体状况。
虽然生理剂量的DHEA在小鼠及人体内没有不良反应,但也有文献报道,实验动物在被给予大剂量的DHEA后出现了肝细胞过氧化酶体增生。经研究发现,DHEA与具有致癌活性的过氧化酶体增生剂作用一致,因此怀疑DHEA具有致癌活性。
1.3 DHEA生理活性
1.3.1抗衰老作用
陈冠敏等[4]研究了DHEA对大鼠血清中SOD活性、MAD含量的影响。结果表明,老年对照组的均比实验组的SOD活性低,MAD含量均却比实验组的高,且老年对照组与高剂量组相比有显著差异(P>0.05),与3月龄的年青大鼠相比,血清中的SOD、MAD值相近,说明DHEA对老年大鼠有一定的抗氧化作用。
1.3.2抗冠状动脉病
沈忠海等[5]在观察血清脱氢表雄水平与男性冠心病状动脉病变程度的关系时,发现在控制其他冠心病的危险条件后,血清DHEA水平、CHOL和年龄仍与冠状动脉病评分有相关性,且具有显著意义(P<0.05)。
1.3.3抗肿瘤
姜艳芳[6]在研究去氢表雄酮及其代谢产物对人肿瘤细胞系的抗增殖作用时发现不同浓度DHEA对Hep G2(人肝癌细胞)和HT29(人结肠癌细胞)细胞增殖抑制率均显著增加(P<0.05)。作用24h时,当DHEA浓度为 100 μmolL1时,细胞增殖抑制率降低最显著(P<0.05)。结果表明,DHEA对肿瘤细胞具有良好的防治作用。
1.3.4对骨质影响
王玉东等[7]通过流式细胞仪检测hMG63(人成骨细胞)细胞凋亡的实验证明,在ERβ高表达时给予hMG63细胞1×107mol/L DHEA培养1h后,用流式细胞仪分析细胞凋亡率时,发现DHEA可明显促进细胞的增殖(P<0.05)和抗凋亡(P<0.01)作用。经研究发现,传统的治疗骨质疏松和骨折的病症所需的激素补充,增加了乳腺癌的发生率。而对于女性在围绝经期和老年期不仅是雌激素水平降低,伴随着脱氢表雄酮水平下降,就显得尤为重要,DHEA肿瘤细胞具有很好的抗增殖作用,因此主张用DHEA治疗绝经后骨质疏松症。
1.3.5调节记忆力
杨晓波等[8]采用老年大鼠作为模型,通过去氢表雄酮干预观察老年大鼠脑内记忆相关脑区胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性、乙酰胆碱(Ach)和大鼠学习记忆行为的变化。结果表明,DHEA干预可使大鼠脑内胆碱能系统活性明显升高,显著改善大鼠学习记忆能力。
1.3.6抗骨关节炎
骨关节炎[9]是一种以软
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