摘 要桦菌芝Pyropolyporus fomentarius（L.ex.Fr.）Teng.为多孔菌科植物木蹄的菌体，多寄生于桦树及栎树的树干上，味淡微苦、性平，能消积、化瘀、抗癌。用于治疗小儿食积、食管癌、胃癌、子宫癌。桦菌芝多糖是从真菌科植物桦菌芝中提取的一种多糖组分，具有抗肿瘤，增强免疫力和降血脂的药理活性。传统水浴浸提多糖存在提取间长、效率低的缺点。近年来，微波辅助提取新技术正被广泛应用于生物、医药和食品等领域，并迅速朝着工业化方向发展。微波是一种电磁能，微波提取大大降低了提取时间，提高了提取速度。因此，微波辅助提取技术在天然活性成分提取中有良好的应用前景，已经成为当前和今后新型提取技术研究的热点之一。本课题研究采用响应曲面法来优化桦菌芝中多糖的提取工艺，最终确定最佳工艺：料液比为1:35，微波处理时间为25min，微波功率为150w，微波温度为62℃。这次研究有效地提高了桦菌芝多糖的提取效率，为桦菌芝的进一步研究提供了一个良好的参考依据。目 录
1 绪论
1.1 研究的背景和意义 1
1.1.1研究的背景 1
1.1.2研究的意义 2
1.2 桦菌芝的研究进展 2
1.2.1主要化学成分 3
1.2.2桦菌芝多糖的研究进展 3
1.2.3桦菌芝相关的新药研发及应用前景 3
1.3 常用提取方法的介绍 4
1.3.1溶剂提取法 4
1.3.2微波提取法 5
1.3.3超声提取法 5
1.3.4二氧化碳超临界流体萃取法 6
1.4 响应曲面法介绍 6
2 实验设计部分
2.1 仪器与试药 8
2.1.1材料预处理 8
2.1.2材料与仪器 8
2.1.3试药 8
2.2 实验方法 8
2.2.1桦菌芝多糖的微波辅助提取 8
2.2.2葡萄糖标准品的制备 8
2.2.3葡萄糖标准曲线的绘制 9
2.2.4样品中多糖含量的测定 9
2.2.5方法学的考察 9
2.2.6单因素试验 9
2
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2.1.2材料与仪器 8
2.1.3试药 8
2.2 实验方法 8
2.2.1桦菌芝多糖的微波辅助提取 8
2.2.2葡萄糖标准品的制备 8
2.2.3葡萄糖标准曲线的绘制 9
2.2.4样品中多糖含量的测定 9
2.2.5方法学的考察 9
2.2.6单因素试验 9
2.2.7响应面优化试验 10
2.2.8数据处理 10
3 实验结果部分
3.1 标准曲线 11
3.2 方法学考察结果分析 11
3.2.1精密度实验结果分析 11
3.2.2重复性实验结果分析 11
3.2.3稳定性实验结果分析 11
3.2.4加样回收率结果分析 12
3.3 单因素结果分析 12
3.3.1料液比对多糖提取率的影响 12
3.3.2微波功率对多糖提取率的影响 12
3.3.3微波时间对多糖提取率的影响 13
3.3.4微波温度对多糖提取率的影响 14
3.3.5响应曲面法设计 14
3.3.6回归模型方程的建立及方差分析 14
3.3.7响应曲面法分析 16
3.3.8小结 18
结论. ..............................................................................................................................20
参考文献..............................................21
致谢24
1 绪论
多糖是机体内天然大分子之一，广泛存在于高等植物、动物、真菌等体内[1]。近年来随着多糖研究的深入，多糖的多种生物活性被发现，如抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、抗炎、抗凝血等[2]。因其对人体正常细胞毒副作用很小，可成为理想的药物来源。但是，植物多糖结构复杂，种类多样，分子量大，极性大，且常与蛋白质、脂质等结合成多糖复合物，这些给多糖的提取分离带来了困难，加之多糖的提取方法和工艺尚未成熟以及效率、成本等多方面的考虑，所以选择一种合适的提取分离方法对多糖的研究具有重大意义[3]。
桦菌芝Pyropolyporus fomentarius（L.ex.Fr.）Teng.为多孔菌科植物木蹄的菌体，用于治疗小儿食积、食管癌、胃癌、子宫癌[4]。本论文采用微波技术辅助提取桦菌芝中的多糖。微波辅助提取技术（MAE）是利用其产生的高频电磁波可以快速到达细胞内部使细胞壁破裂，有效成分溶解流出的新技术[5]。它是近年来发展起来的较新型的提取技术，具有选择性高、生物活性不易破坏、用时短及排污量少等优点[6]。
本实验采用响应曲面法。该方法又称响应面法，是单因素试验优选法，这种方法是在其他条件不变的情况下，考察某一种因素对其收率的影响[7]。通过建立不同的考察因素来进行多个反应优化反应条件。国内多采用的优化方法是正交水平因素设计试验表，传统的正交试验，只可以给出最佳因素水平组合却无法找出整个区域上的缺陷，响应曲面法则是运用多元二次回归方程来拟合响应值和影响因素之间函数关系的优化统计方法，其图形是三维立体图，各因素的相互影响可在一个图像上来表达，全面、直观、一目了然[8]。一般主要包括以下几个步骤：构建模型、实验设计、检验模型、优化最佳组合条件等[9]。该方法回归方程的精确度高，实验次数少，耗能小并且可以研究多种因素之间的相互优点，特别适合生产大工艺。
1.1 研究的背景和意义
1.1.1 研究的背景
在自然环境污染越来越严重，社会环境竞争激烈的今天，真菌作为纯天然资源因其独特的功效，正为人类的健康起到越来越重要的作用。真菌菌体中含有丰富的营养和药用成分，多糖组分中以葡聚糖为主，以具有β1、3葡萄糖苷键结合的直链和β1、6葡萄糖苷键结合的支链构成为特殊的空间结构，具有很好的生理活性，对人类健康有着极其重要的作用[10]。如提高机体免疫性，增强淋巴细胞的活力，加强机体防御能力，促进白细胞对病毒菌和异常细胞吞噬功能，消除体液中自由基的产生，防止细胞膜质的氧化，保护正常细胞，降低血液中的胆固醇、降血压和血脂，能产生多种抗菌素对病毒、细菌有良好的抑制作用等[11]。真菌多糖除对疾病有特殊的治疗效果外，它的作用往往是综合性的，它们都有滋补强化、扶正固本、抗衰老的作用，是一种天然补品[12]。目前，真菌多糖已成为分子生物学、医学、食品科学等领域的研究热点之一[13]。通常情况下，用热水提取法或其他方法从真菌中提取多糖，然后过滤，再浓缩，最后用有机溶剂沉淀而得到[14]。从多糖水溶液中提取多糖，首先可用透析或超滤等方法去掉小分子物质（单糖、寡糖、氨基酸、短肽、无机盐等），然后设法去掉水分（各种合适的干燥方法、超滤以及有机溶剂沉淀法等）。根据多糖类物质易溶于热水而不溶于高浓度酒精的原理，真菌多糖的提取通常采用水煮醇沉（热水提取及酒精沉淀法）的常规方法[15]。
1.1.2 研究的意义
多糖是桦菌芝中主要的有效成分，选择一种合适的提取工艺最大限度地从桦菌芝中将多糖提取出来，是开发利用这一天然药物资源最关键的一步。纯多糖含多个极性基团(主要是羟基和其他极性取代基)，水溶性一般较好，特别是在热水中溶解度较大；多糖溶液在浓度较大时，可通过加入极性有机溶剂(乙醇、丙醇)将其析出。食用菌多糖的提取常常受提取时间、温度、
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