超声法优选黄芪中多糖的提取工艺研究(附件)
1 概述
1.1 黄芪化学成分研究状况 1
1.1.1 皂苷类 2
1.1.2 黄酮类 2
1.1.3 多糖类 2
1.1.4 氨基酸 2
1.1.5 其他 2
1.2 黄芪多糖的药理作用 2
1.2.1 对免疫系统的影响 3
1.2.2 抗肿瘤作用 3
1.2.3 对心血管系统的作用 3
1.2.5 抗病毒作用 4
1.2.6 抗氧化延缓衰老的作用 4
1.3 黄芪的应用 5
1.4 黄芪多糖的提取 5
1.4.1 蒸馏水提取法 5
1.4.2 碱水提取法 5
1.4.3 微波提取法 5
1.4.4 超滤法 5
1.4.5 超声波提取法 6
1.5 响应曲面的概述 6
2 实验部分
2.1 材料与方法 7
2.1.1 药品与试剂 7
2.1.2 实验仪器 7
2.1.3 硫酸苯酚法测多糖含量 7
2.1.4 标准曲线的制备 7
2.1.5 黄芪中多糖提取工艺 8
2.1.6 黄芪中总多糖得率的测定 8
2.1.7 单因素试验 8
2.1.8 响应曲面法试验设计 9
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/> 2.1.1 药品与试剂 7
2.1.2 实验仪器 7
2.1.3 硫酸苯酚法测多糖含量 7
2.1.4 标准曲线的制备 7
2.1.5 黄芪中多糖提取工艺 8
2.1.6 黄芪中总多糖得率的测定 8
2.1.7 单因素试验 8
2.1.8 响应曲面法试验设计 9
2.2结果与分析 9
2.2.1单因素试验结果 9
2.2.1响应曲面试验结果 12
结 论 16
参考文献 17
致 谢 19
1 概述
黄芪,别名黄耆、独椹、箭芪[1]。本品为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根。其味甘,性微温,归脾、肺经,有补气固表,利尿,托毒排脓,生肌等功效。蒙古黄芪根呈长圆柱形,单枝或有分枝,上端较粗,长3090cm,直径13.5cm。表面淡棕色或淡棕褐色,有不整齐的细纵皱纹及稀疏须根痕。皮部白色或淡黄白色,木部较紧实,黄色,有多数放射状纹理和裂隙,菊花心明显[2]。(图1.1和1.2)
图1.1 完整药材 图1.2 饮片
黄芪比较喜好清凉、光照充沛的环境。耐寒冷,怕炎热,耐干旱,忌水涝。播种两到三年之后采收,911月或春季冬芽萌动前采挖,但秋季采挖的质量比较好。深刨以防止把根折断,挖出来之后,去掉根头,除净泥土,剪去侧根及须根,晒到六七成干,放12d后再晒,直到晒干为止。分出大小,整理好后,扎成小捆,即是生黄芪[3]。研究证明,黄芪有保护心肌、强心,调节血压,加强机体免疫功能,保肝,扩张血管、降低区域血管阻力、保护血管内皮细胞、改善微循环,双向调节血糖,抗衰老,抑制血小板聚集、保护和促进造血系统的作用[4]。
1.1 黄芪化学成分研究状况
黄芪含有多种活性化学成分,包括黄酮,皂苷,多糖,氨基酸,叶酸和其它微量元素。
1.1.1 皂苷类
含有黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ及大豆皂苷Ⅰ,大豆皂苷Ⅰ是用大豆皂苷元B为苷元,黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ以9,19环羊毛脂烷型的四环三萜类即环黄芪醇为苷元,有防止和医治实验性大鼠胃溃疡,抑制中枢神经,镇痛,控制骨质疏松的效能。
1.1.2 黄酮类
蒙古黄芪含山柰酚、槲皮素、异鼠李素、鼠李柠檬素,山柰素4甲醚3葡萄糖苷,异鼠李素3βD葡萄糖苷,异槲皮苷,芒柄花黄素,3'羟基芒柄花黄素,黄芪异黄烷苷。膜荚黄芪还含有2',4'二羟基5,6二甲氧基异黄烷,7,3'二羟基4',5'二甲氧基异黄烷等,有增加心脏功能和冠脉血流量的作用。
1.1.3 多糖类
含葡萄糖AG1、AG2,都具有免疫促进作用;还含有黄芪多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,其中Ⅱ和Ⅲ是葡萄糖,Ⅰ和Ⅱ有免疫活性增强作用。又含酸性多糖AMonS,由L阿拉伯糖,D半乳糖,D半乳糖醛酸,D葡萄糖醛酸(18:18:1:1)组成,也有免疫功能加强作用。
1.1.4 氨基酸
有20多种,如γ氨基丁酸、天冬酰胺、天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等,可以增加抵抗力,补充蛋白质,延缓皮肤衰老等作用。
1.1.5 其他
黄芪中还含有微量元素、甾醇类物质、叶酸、亚麻酸、亚油酸、甜菜碱、胆碱、咖啡酸、香豆素、尼克酸、核黄素、维生素P、淀粉E等。
1.2 黄芪中多糖的药理作用
黄芪多糖具有增强机体免疫系统功能,抗肿瘤,抗病毒,抗氧化,保护肝脏,双向调节血糖等多种药理作用[5]。
1.2.1 对免疫系统的影响
免疫系统是机体重要的防御系统,分为固有免疫和适应免疫。有研究表明黄芪多糖对机体免疫系统的应答过程有一定的作用。胡庭俊等[6]试验发现,黄芪多糖可以明显提高小鼠脾淋巴细胞PKC活性,并且能够有效改善环磷酰胺引发的免疫抑制现像。蒋瑞雪等[7]的研究表明,黄芪多糖可以加快小鼠产生抗体器官的增生,说明黄芪多糖对机体抵抗力加强作用较好。邓旻等[8]试验结果显示,用黄芪多糖诱导培育得到的树突状细胞对异基因外周血T淋巴细胞的增生有显著激发作用,且伴着细胞数目的增加而效果加强,展现出较好的量效关系,确认黄芪多糖不但可以定向诱使脐血单核细胞分化成树突状细胞,而且可以促进树突状细胞的成熟,特异性激活免疫细胞,产生抵抗力。
1.2.2 抗肿瘤作用
黄芪多糖能影响具有肿瘤杀伤的细胞因子,从而起到抗肿瘤作用。许杜娟等[9]用移植癌症的小鼠做实验,发现黄芪多糖能提高肿瘤杀伤因子TNFα的活性、增加IFNγ的产生。由此证明黄芪多糖是通过影响TNFα和INFγ而实现抗肿瘤作用。
有研究发现机体在肿瘤发生时,体内产生IL2和TNFα会增多,可以提高机体的抵抗力而抵御肿瘤的杀伤作用[10]。任美萍[11]对黄芪多糖的抗肿瘤作用进行研究时发现黄芪多糖能增加被移植了肿瘤小鼠血清中IL2和TNFα的量,说明黄芪多糖的抗肿瘤作用与其增强机体抵抗力有关。
1.2.3 对心血管系统的作用
动脉粥样硬化、糖尿病等多种血管疾病对血管内皮功能都有一定的破坏力。黄芪多糖不但能够通过减少血清中的TC、TG、丙二醛和内皮缩血管肽而减弱对血管的破坏能力而且还具有
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