本人签字 日期 摘 要天麻是兰科天麻属植物天麻(Gastrodia elata Blume)的根块茎，在我国是珍贵中药材其中的一个。天麻中含有诸多的化学成分，其中主要的化学物质包含有天麻素、天麻多糖、维生素A，其次还含有及其他少量的甙类、生物碱、等化学物质,天麻素和天麻多糖是天麻药效作用主要物质。天麻具有镇静、安神作用,可用于治疗四肢麻木，头脑发昏，眼睛发花，小儿惊厥等多方面的疾病。天麻在我国药材种植里具有普遍性，储存量也较多，使用量也较为普遍，但是人们对于天麻中具体活性成分研究较少。如今人们针对天麻多糖的提取工艺方面的改进，为能够更深层次了解天麻的活性成分提供一定理论依据。目前天麻多糖提取方式主要有水提醇沉法、酶解法、超声辅助法、微波辅助法等。超声法提取法是本文采用的主要提取方法，并根据响应曲面法研究其最优工艺参数。通过单因素实验超声时间、超声温度、料液比对天麻多糖提取率的影响为考察因素。最后得出最优提取工艺参数为超声时间（35 min）、超声温度（44℃）、料液比（1:23 g / mL），随后采用分光光度法和化学发光法比较天麻多糖与、VC清除自由基活性比较，探讨天麻多糖抗氧化的能力，得出天麻多糖均表现不同程度的抗氧化能力。
目 录
1. 绪论 1
1.1 天麻的来源 1
1.2 天麻的研究背景 1
1.3 天麻中的主要成分 2
1.4 天麻的研究现状 2
1.4.1 提取工艺研究 2
1.4.2 天麻自由基研究 2
1.5 天麻多糖的化学成分研究 3
1.6 天麻药理研究进展 3
1.7 超声波简介 4
2. 实验部分 5
2.1 仪器与试药 5
2.1.1 试剂及药材 5
2.1.2 实验仪器与设备 5
2.2 实验流程 5
2.3 实验方法的确定 5
2.3.1 粗多糖含量测定方法 5
苯酚硫酸比色法。 5
2.3.2 苯酚浓度的确定 6
2.3.3 硫酸量的确定 6
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3.4 标准曲线的绘制 6
2.4 单因素考察 7
2.5 单因素实验结果 7
2.5.１ 料液比对天麻多糖提取率的影响 7
2.5.2 温度对天麻多糖提取的影响 8
2.5.3 超声时间的影响 8
2.6 响应曲面优化 9
2.6.1 响应曲面优选分析 9
2.6.2 响应曲面图谱与分析 11
2.6.3 响应面最后优化的结果 13
2.7.实验方案的验证 13
2.8.1 对DPPH的清除作用 13
2.8.2 对ABTS自由基阳离子清除实验 14
讨 论 16
参考文献 17
致 谢 19
1 绪论
1.1 天麻的来源
兰科天麻属的天麻是草本且长时间生长的植物，全球主要生长在中国、不丹、尼泊尔等。天麻没有绿叶且根块茎肥厚，果实是倒卵状椭圆形的蒴果，繁衍方式也主要是以植物的块茎或者植物的种子。以前天麻常被人类仅当作药用药材，需求量比较单一。但是随着人们对生活质量要求不断提高，对医疗保健的观念也日渐加重，因此现今天麻作为药食两用的药材需求量也越来越大，而对于中药研究行业也应该重视起来。
天麻多糖是天麻中主要成分之一，有广泛药理活性，因此有待全面开发应用，有广阔的研究与开发前景。作为药物资源规模开发利用，将产生巨大的经济效益和社会效益，同时也加快我国现代中药发展步伐。
1.2 天麻的研究背景
我国云、贵、川等地区是天麻主要产区，因此可谓我们国家天麻药资源极为丰富。天麻常常具有镇静安神等疗效，所以常用作为安神镇神药使用[12]，其原因是天麻素，即对羟基苯βD吡喃葡萄糖甙是主要有效成分存在，也有研究证实动脉粥样硬化造成的锥基底动脉供血不够的症状，天麻素也有良好以改善效果[3]。另外天麻素还对心脏的血量不足具有改善效果，同时也有拮抗兴奋性氨基酸神经毒性以及对模拟脑少血再灌注损伤星形胶质细胞良好的疗效 [46]。随着现今植物类多糖在药理和保健领域的研究和应用关注度与日俱增，研究发现还有许多独特的作用，譬如在降血压、自由基的清除、抑菌、抗眩晕领域均表现出可观的药用价值[7]。因此可见天麻多糖作用及药理作用研究报告较多，但是对其天麻多糖最佳提取方法研究及其抗氧化研究少见报告。本论文用超声波响应面法优化天麻多糖提取工艺参数，旨在提高天麻多糖的提取率，随后选择分光光度法比较天麻多糖与2种天然抗氧化剂、VC对 DPPH、ABTS的清除能力，通过与二者的比较能够更好利用我国丰富的天麻资源迈入新的篇章。
1.3 天麻中的主要成分
科学技术飞速进步的今天，人们已经得知天麻中有诸多化学成份，如：天麻多糖、天麻苷、香荚兰醇、醛等物质。其中含量最高是天麻甙（gas TCLMLbodin）。
1.4 天麻的研究现状
1.4.1 提取工艺研究
微波法[8]、酶解法[9]、超声提取和浸提法是现在提取多糖的主要方法，一般实验中常用水作为提取剂。
朱晓霞等[11]以正交法考察单因素对天麻中多糖提取影响，考察因素分别为温度、液料比比、时间。其实验结果表明影响因素大小为温度>时间>液料比。并且把超声波法和微波法对提取率作为对比，得出微波处理作用相对而言较为理想。
姜波等[12]对天麻中的多糖提取采取的是水浸提法。实验结果均测得未纯化与纯化后的粗多糖提取率，分别为12.93%，9.22%，随后测量纯化与未纯化中的多糖含量值，得到结果分别为54.57%,38.42%。
张梦娟等[13]考虑用实验中的温度、时间、料液比这三个单因素探究对多糖提取的效果，并进行了优化参数实验。得出的结论是这三种因素在实验结果中都有很明显的显著性表现。
兰金荣等[14]主要采用单因素方差分析法为实验方法，对提取天麻多糖含量影响中的酶解中温度、浓度和pH的研究。分析了响应面法与正交设计方法二者的差异，得出前者方法更为优良。
叶文斌[15]获得天麻的活性物质采用了效应面与酶法联用工艺研究。天麻中的天麻素与天多糖得率的分析采用的是单因素方差法。得最优参数依次为温度:54.36℃、pH:4.73和浓度:0.09 g。
王勋等[16]用复合酶提取天麻多糖对传统提取进行比较，对比了溶剂pH酶的用量，及实验反应时间、温度共四个单因素对天麻多糖提取的影响。正交实验法进行实验。结果显示酶解法比传统工艺法好。
1.4.2 天麻自由基研究
谢学渊等[17]发现天麻中多糖是能够提高D葡萄糖致衰老小鼠的学习记忆能力主要成份，其原因是该物质能让脑神经复原；并显著提高机体氧化代谢相关酶的活性能力，总体显现出的一定抗氧化活性能力。实验结论是天麻中天麻多糖是具有阻止氧化、减缓衰老等效果。
刘明学等[18]采用Feton体系与邻苯三酚自氧化法为数为实验基准。测定天麻多糖对OH及O2自由基的清除效果是用通过比色法测得结果，得到其结果说明氧自由基被天麻多糖观清除效果显著。

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