摘 要银杏叶是近年来国内外研究开发的热点之一，其提取物 (EGb) 被广泛用于心脑血管疾病，大量研究表明，银杏叶对心脑血管疾病的防治作用与其抗氧化活性密切相关。本次实验，我们主要用银杏叶为主原料，参照Jessica Tabart 等的方法测定总多酚含量，利用超声波辅助提取研究甲醇体积分数、超声波提取时间、液料比、超声波功率及提取温度对银杏叶多酚得率的影响并综合单因素实验结果，根据Box-Benhnken的中心组合实验设计原理，采用响应面法，在四因素三水平上对银杏叶多酚的提取工艺进行优化研究。然后用极性较大的乙酸乙酯来萃取获得多酚物质，通过其对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用以及其还原能力的测定，探讨银杏叶多酚物质的抗氧化活性，并与人工合成抗氧化剂BHT对自由基清除能力及还原能力进行比较。实验结果表明银杏叶的多酚物质具有很强的抗氧化性，优于合成物BHT。
Key words: response surface; Ginkgo biloba leaves; polyphenols; extraction process; antioxidant activity.目 录
1 绪论 1
1.1 研究目的与意义 1
1.2 研究现状和发展趋势 1
1.3 抗氧化研究 2
1.3.1 总还原能力 2
1.3.2 对羟基自由基的清除能力 2
1.3.3 对超氧自由基的清除能力 2
2实验材料与方法 3
2.1 实验仪器 3
2.2 实验试剂 3
2.3 实验方法 3
2.3.1 银杏叶中多酚的提取 3
2.3.2 银杏叶多酚测定 3
2.3.3 DPPH﹒清除率的测定 4
2.3.4 还原能力的测定 4
3 实验结果与分析 5
3.1 银杏叶多酚提取条件的优化实验 5
3.1.1 料液比对多酚提取的影响 5
3.1.2 乙醇体积分数对多酚提取的影响 5
3.1.3 超声波功率对多酚提取的影响 6
3.1.4 超声时间 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
对多酚提取率的影响 7
3.1.5 响应面试验设计 7
3.1.6 建立模型方程 8
3.2 响应面分析试验 8
3.2.1 响应面试验结果 8
3.2.2 显著性检验 9
3.2.3 响应面分析  10
3.2.4 优选提取条件的结果 12
3.3 实验验证性方案 12
4 银杏叶多酚物质抗氧化性的研究 14
4.1 银杏叶乙酸乙酯萃取母液及浓度梯度的配制 14
4.2 实验测定原理及方法 15
4.2.1 银杏叶乙酸乙酯萃取物清除DPPH自由基的测定 15
4.2.2 银杏叶乙酸乙酯萃取物清除羟基自由基（OH）的测定 15
4.2.3 银杏叶乙酸乙酯萃取物清除超氧阴离子自由基（O2）的测定 16
4.2.4 银杏叶乙酸乙酯萃取物还原能力的测定 17
5银杏叶多酚物质抗氧化性结果与讨论 19
5.1 对DPPH自由基的清除能力 19
5.2 对羟基自由基（OH）的清除能力 19
5.3 对超氧阴离子自由基（O2）的清除能力 20
5.4 还原能力的测定 21
6结论 23
参考文献 24
致 谢 25
1 绪论
1.1 研究目的与意义
多酚类化合物是指分子结构中有若干个酚性羟基的植物成分的总称[1]，包括黄酮、单宁类、酚酸类以及花色苷类等种类。多酚类化合物具有降血糖、降血脂、抗炎抗菌、抗病毒和抗癌等多种活性功能[2]。多酚类化合物是一种广泛存在于植物的果、叶和根中的一类次生代谢产物，大量研究表明，银杏叶中含有较多的黄酮类、银杏酚酸等多酚类化合物[3]，然而目前对银杏叶中多酚的研究还较少，本研究对银杏叶多酚进行提取，并研究了其抗氧化性能，为银杏叶的综合开发利用开辟新的途径。
1.2 研究现状和发展趋势
银杏叶提取物被广泛用于也脑血管疾病和抗老年痴呆作用的治疗，人们对其有效活性成分银杏叶黄铜类多酚化合物展开了大量提纯和活性研究；研究证明，黄酮类多酚化合物对也脑血管疾病的防治作用与其抗氧化活性密切相关。
欧洲最早对银杏叶提取物的药用价值做出了实质性的研究。德法两国率先研制成功了银杏叶提取物口服药物，又陆续研制了多种银杏叶提取物制剂。德国首先在20世纪60年代就开发出银杏叶药用制剂，1968年起，德法两国合作，其开发的注射剂提取工艺为基础，并将经过分离纯化、浓缩和精制的提取物加以规范化和标准化。国内医院脑血管及抗痴呆药物市场已达到接近300亿元，而仅全世界银杏叶注射剂市场份额远远超过50亿美元，银杏叶提取物有较大的市场需求。目前，天然植物用药越来越受到世界上各国的青睐与重视，为银杏提取物迎来发展机遇。全世界有140多个国家在销售银杏叶制剂，国内银杏叶提取物生产厂家的数量较少、生产规模小，而且提纯工艺和产物质量存在严重的问题，部分生产广家为使其产品主要成分银杏叶黄酮类多酚化合物化学含量指标符合客户标准，采用水提取、加入强酸、渗入银杏树皮、根皮与银杏叶共同提取，加入其它含有黄酮类多酚化合物的植物提取物使其含量达标，而通过造假和低劣提取工艺的产物并不能发挥药效，且对人体有害。因此，开发髙效提取银杏叶多酚工艺是市场要求的必然。
1.3 抗氧化研究
对银杏叶提取物的总还原能力，对羟基自由基和对超氧自由基的清除能力，以及通过对比与VC等的抗氧化能力来分析银杏叶多酚的抗氧化能力。
1.3.1 总还原能力
银杏叶提取物的还原能力是提现抗氧化性能的方式。多酚提供电子与自由基进行反应将活泼的自由基还原。采用普鲁士蓝法测定提取物中多酚的总的还原能力，即提取物中的多酚将K3Fe(CN)6中的Fe3+还原为Fe2+，生成普鲁士蓝。在700 nm处测定吸光值A的变化，吸光值越髙说明样品的还原力越强，样品的抗氧化能力也就越强。
1.3.2 对羟基自由基的清除能力
羟基自由基是由硫酸亚铁与H2O2反应产生，羟基羟化水杨酸，通过测定羟基化后的水杨酸盐复合物在560 nm处的吸光度大小间接表示羟基的量。
1.3.3 对超氧自由基的清除能力
测定机理是邻苯三酚在碱性条件下能发生自氧化，生成有色中间物和超氧阴离子，有色中间物在420 nm处有最大吸收峰，超氧阴离子对自氧化又起催化作用，通过有色产物的含量多少，可判断超氧阴离子生成量的多。2实验材料与方法
2.1 实验仪器
仪器名称
生产厂家
型号
超声仪
昆山市超声仪器有限公司
KQ5200DE
紫外分光光度计
北京普析通用仪器有限责任公司

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