建立一种高效液相色谱法测定5-溴-2-氯-4´-乙氧基二苯甲烷含量的分析方法，优化各液相条件，确定最佳流动相比例为乙腈-水=80:20，紫外检测波长为220 nm，流速为1.0ml/min，温度为30℃。采用高效液相色谱法，以乙腈-水为流动相，使用Thermo C18柱（4.6*250 mm，5 μm）为色谱柱和Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector紫外检测器，在220 nm波长下进行定量分析。结果表明该方法在浓度范围为80～400 μg/mL呈良好的线性关系，校正系数为0.9995，回收率在95%～104%之间，专属性其杂质与主峰的分离度均≥1.5，耐用性RSD≤3%，中间精密度其RSD≤2%。关键词 5-溴-2-氯-4´-乙氧基二苯甲烷，高效液相色谱法，方法学验证
目 录
1 引言 1
1.1 糖尿病的概述 1
1.2 达格列净的简介 2
1.3 达格列净的国内外研究现状 3
1.4 高效液相色谱在药物分析中的应用 3
1.5色谱分析方法的建立与分析方法验证的项目 4
1.6 本文的研究内容 7
2 实验部分 7
2.1 仪器与试剂 7
2.2 试验方法 8
3 结果与讨论 16
3.1 波长的选择 10
3.2 流动相的选择 11
3.3 线性 11
3.4 精密度 12
3.5 回收率 13
3.6 专属性 13
3.7中间精密度 14
3.8 耐用性 14
结 论 15
致 谢 16
参考文献 17
1 引言
1.1 糖尿病的概述
1.1.1 糖尿病的定义及分类
糖尿病是一组由于胰岛素分泌不足及其生物效应降低引起的以高血糖为特征的全身性、代谢型慢性疾病。慢性高血糖会导致眼、神经、心血管以及肾的长期损害、功能不全和衰竭等。
近10年来由于对糖尿病的分子生物学、病因和免疫学研究都获得了突破性的进展，于1997年经美国糖尿协 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: @351916072@ 
会公布，提出了糖尿病的分类和诊断标准的建议，并于1999年被世界卫生组织咨询委员会认可。糖尿病分为主要为1型糖尿病和2型糖尿病。
1型糖尿病，以前称为胰岛素依赖性糖尿病，是一种自身免疫性疾病，占糖尿病患者总数的10%，在儿童和青少年居多。主要原因是胰岛β细胞功能缺陷，机体无法分泌正常的胰岛素，导致血糖升高。1型糖尿病的诱发病因主要有自身免疫系统缺陷，遗传因素、病毒感染可能是诱因以及其他因素。其中最主要的是自身免疫系统缺陷，在患者的血液中可检查出多种异常抗体，这些抗体可破坏胰岛B细胞不能正常分泌胰岛素。这种类型的糖尿病需要提供恰当的外源性胰岛素来控制血糖水平。
2型糖尿病（T2DM）属于进程性紊乱性疾病，主要表现为胰岛素分泌不足，胰岛素抵抗力下降，血糖值偏高等。2型糖尿病的诱发病因主要有遗传因素、肥胖、年龄、高热量饮食等，其中主要为遗传因素，2型糖尿病有家族发病的特点。通常2型糖尿病的治疗是通过增加胰岛素的抵抗力、促进胰岛B细胞增加胰岛素的分泌量来实现的。2型糖尿病的发现是一个漫长的过程,许多病人在被诊断为2型糖尿病时，一半患者的B细胞功能己经丧失，患者身体的胰岛素的抵抗、分泌能力及血糖含量早己处于非正常状态。患者通常还会出现胰高血糖素分泌量远超过正常值的现象，而这不仅会加剧高血糖症状还会使机能素乱更为复杂。2型糖尿病的治疗耗时较长，而且随着时间的推延,会出现各种并发症使治疗更为复杂困难，即使在目前多种药物联合治疗的情况下，仍有大量患者无法恢复正常血糖值，根治糖尿病以往称为非胰岛素依赖性糖尿病或成人发病的糖尿病的2型糖尿病占糖尿病患者总数的约90%。 40岁以上的大人或老年人，有明显的家族遗传型，大多数患者轻度口干，口渴等症状。
1.1.2 糖尿病的治疗药物
目前有大量的药物可用来治疗2型糖尿病，这些药物都是降低胰岛素分泌力或增加胰岛素抵抗力。主要有以下几类：
（1）磺脲类降糖药物：这类药是治疗2型糖尿病最先使用的药物，已经发展到了第3代。第一代磺脲类降糖药物是甲苯磺丁脲，因为对骨骼的毒性太大被停用。第二类磺脲类药物，第二代有优降糖，其降血糖作用虽然强，但容易发生低血糖；随后发现了达美康、美吡达、克糖利、糖适平等。此类药有胃肠道反应及肝功能损害等副作用。
（2）α葡萄糖苷酶抑制剂：α葡萄糖苷酶抑制剂是目前应用广泛的降糖药，属于非依赖胰岛素口服降糖药。主要有拜糖平、阿卡波糖、米格列醇等，其作用原理是降低饭后血糖，这类药物对胃肠道有一定的刺激性。
（3）双胍类降糖药：双胍类主要是抑制肠道对葡萄糖的吸收，增加组织对葡萄糖的利用，从而起到降低血糖的作用。这类药包括苯乙双胍（降糖灵）和二甲双胍，但可引起食欲减退、恶心、腹胀、剂量大还可引起乳酸酸中毒。
（4）噻唑烷二酮类抑制剂：是一种过氧化物酶体增值物激活剂，这类药物的作用机制是通过药物的作用增加人体肌肉、脂肪和肝脏对内源和外源胰岛素的敏感性，同时又可以改变脂肪组织组织脂质的代谢过程来降低肝脏葡萄糖量代表药物：吡格列酮、法格列酮、达格列酮、罗格列酮等。伴随副作用主要有:肝功能异常，水肿，体重增加，轻中度的贫血。
（5）钠—葡萄糖协同转运体（sodiumglucose cotransporter2 ，SGLT2）：通过抑制近端肾小管的葡萄糖重吸收作用，增加尿糖排出量，同时进一步增加胰岛素的分泌，增加胰岛素的抵抗，使血糖恢复正常。主要药物有达格列净、卡格列净、伊格列净、衣帕列净等。
1.2 达格列净的简介
达格列净是由阿斯利康公司和中美联合百时美施贵宝公司（BSM）开发的钠依赖性葡萄糖转运蛋白（SGLT）抑制剂，化学名为2氯5(βD吡喃葡萄糖1基)4´乙氧基二苯甲烷，商品名为 Farxiga。2012 年 11 月被EMA批准上市，2014 年 1 月被美国FDA批准上市。研究显示，SGLT（主要是 SGLT2）的作用机理是可调节血糖在肾小球的滤过重吸收过程，因此达格列净通过减少肾脏对葡萄糖的重吸收，增加葡萄糖在尿液中的排泄，从而降低血糖。达格列净的抑制作用，是非常有效的SGLT2 抑制剂。常见的不良反应有多尿、背部疼痛、尿路感染、血脂异常、低血糖、生殖器官感染、血细胞比容增加等[12]。

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