目的 本文旨在开展中药威灵仙水溶性成分的提取工艺研究，基于HPLC分析方法，了解工艺参数对威灵仙水溶性成分提取的影响行为，优选出最佳水提工艺，为进一步研究威灵仙的活性成分提供样品。方法 建立HPLC分析方法，选取水提工艺优化指标，通过单因素试验探讨料液比、温度、提取时间、提取次数对威灵仙中水溶性物质提取效率的影响；通过正交试验确定威灵仙水溶性物质的最佳提取工艺。结果 研究结果表明，料液比为18，温度为100℃，提取时间为90分钟、提取次数为3次的工艺条件为威灵仙水溶性成分的最佳提取工艺条件。结论 确定了威灵仙水溶性成分的最佳提取工艺。关键词 威灵仙，提取，正交实验，HPLC
目 录
1 引言1
1.1 威灵仙成分研究进展 1
1.1.1 挥发类成分 1
1.1.2 三萜及皂苷类化合物1
1.1.3 黄酮类化合物2
1.1.4 生物碱类化合物2
1.1.5 其他类成分2
1.2 威灵仙提取研究进展2
1.2.1 黄酮类成分提取2
1.2.2 挥发油成分提取3
1.2.3 总皂苷成分提取3
1.3 研究目的与意义3
2 材料与试剂3
2.1 试验材料3
2.2 试验仪器4
2.3 实验试剂4
2.4 实验设备4
3 实验方法5
3.1 制备工艺5
3.2 HPLC分析5
3.2.1 色谱仪器及洗脱方法5
3.2.2 HPLC图谱6
3.3 提取工艺考察研究6
3.3.1 单因素试验考察6
3.3.2 正交试验考察9
结论 11
致谢 12
参考文献13
1 引言
威灵仙(Clematis chinensis Osbeck)是药用植物,为毛茛科植物威灵仙、棉团铁线莲或东北铁线莲的干燥根及根茎,中医临床一直用其治疗风湿痹痛,其化学成分复杂,药理作用广,临床应用范围广泛。威灵仙性辛、咸、温 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
,根和茎具有祛风除湿、通络活血、消骨鲠之功效。在我国分布广泛,主要产于云南南部、贵州、四川等地区。三种药材基源之间的物理性状和显微鉴别都有较大差异,但共有的有效化学成分构成其发挥相同药理作用的物质基础。威灵仙作为传统中药之一，在现代临床实践中威灵仙新的用途不断的被发现，如治疗胆结石，跟骨骨刺、足跟痛、食管癌、抗肿瘤、保肝及降血糖、降血压［1］等。
1.1 威灵仙成分研究进展
威灵仙化学成分较为复杂，其化学成分有三萜类、黄酮类、木脂素类、香豆素类、挥发油类、甾体类、生物碱类、有机酸类、大环化合物及酚类化合物等，其中三萜皂苷，黄酮、木脂素是威灵仙主要的化学结构类型［2］。
1.1.1 挥发类成分
现有文献表明,威灵仙发挥其药理作用重要的物质基础之一为其中的挥发性物质,威灵仙中挥发性成分较为复杂,威灵仙、棉团铁线莲和东北铁线莲三种药材基源中均含有亚麻酸、棕榈酸、棕榈醇三种物质,解释了不同基源药材发挥相似药理作用的基础,三者总含量在挥发性成分中高达50%左右［3］。
李佳通过分离东北铁线莲的干燥根石油醚萃取部分得到β谷甾醇、豆甾醇、木栓酮、表木栓酮四个化合物,其中表木栓酮为首次从该植物中得到[4]。傅瑶采用超临界萃取方法萃取得到威灵仙挥发油,并鉴定其中的化学成分,共得出156种化合物,含量占威灵仙总挥发油的85.03%。主要成分有亚油酸(18.47%)、l(+)抗坏血2,6二棕榈酸酯(8.83%)、穿贝海绵甾醇(5.48%)、白桦脂醇(3.33%)、豆甾醇(3.16%)等,此外,通过气质联用技术分析首次从威灵仙中发现了研究所报道的原白头翁素(0.30%)有效成分[5]。
1.1.2 三萜及皂苷类化合物
五环三萜类齐墩果烷型皂苷是威灵仙中皂苷类型，皂苷元有齐墩果酸、常春藤皂苷元，苷元所结合的糖数目与种类各异，因此，威灵仙中皂苷类物质具有明显的抗炎抗肿瘤等一系列药理作用。董彩霞等首次从棉团铁线莲分离得到了木栓酮（friedelin）[7]。Mimaki Y等从威灵仙中分离得到8个三萜皂苷，其中五个新皂苷，其苷元均以齐墩果酸为基本母核[8]。Shi SP等从东北铁线莲中分离得到7个三萜皂苷，其中4个为新化合物[9]。
1.1.3 黄酮类化合物
董彩霞[10]等研究分离年团铁线莲，从中首次分离得到12个化合物。分别鉴定为3,5,6,7, 8,3,4七甲氧基黄酮（3,5,6,7,8,3,4heptamethoxyflavone）、川陈皮（nobiletin）、甘草素(liquiritigenin)、橙皮素（hesperetin）、柑桔黄素（naringenin）、甘草素7OβD吡喃葡萄糖苷（liquiritigen7OβDglucopyranoside）、5,7,4三羟基3甲氧基黄酮素7OɑL鼠李糖（1→6）βD葡萄糖苷5,7,4trihydroxymethoxy flavanone7OɑL rhamnopyranosyl(1→6)βDglucopyranoside）、6hydroxybiochin A、芒柄花素（formon onetin）、大豆素（daidzein）、鸢尾苷（tectoridin）和染料木素（genistein）。
1.1.4 生物碱类化合物
Shi SP[11]等从东北铁线莲的根中分离得到5种吲哚型生物碱。
1.1.5 其他类成分
从威灵仙的三种基源植物中分离得到的还有有机酸类化合物如阿魏酸、异阿魏酸、棕榈酸、亚油酸、香草酸、丁香酸和肉豆蔻酸等；香豆素和木脂素类化合物如丁香脂素、刺槐素7ɑL吡喃鼠李糖基（1→6）βD吡喃葡萄糖苷和丁香树脂醇4OβD葡萄糖；香豆素；异落叶松脂素。此外，已分离得到的化合物还有丹参素甲脂、白头翁素和原白头翁素、胡萝卜苷和β胡萝卜苷、蒽醌、氨基酸等物质。
威灵仙中富含Zn、Cu、Fe、Ni、Ca、Mg等微量元素，其中以Fe、Zn含量最高[12]。

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