本研究采用HPLC法测定威灵仙中5-HMF的含量。采用C18色谱柱，流动相为乙腈-0.5%醋酸水溶液（V/V=5.5:94.5），柱温为30℃，流速为1.0 mL·min-1，进样量为20 μL，检测波长为284 nm。通过对水提工艺优化，确定提取温度为100℃、提取次数为3次，一次120 min。实验结果表明5-HMF在0.6581~21.07 μg·mL-1的范围内呈现良好的线性关系（r=0.9999），平均加样回收率为99.8%，RSD为1.2%。不同产地的威灵仙中的5-羟甲基糠醛的含量不同且差异较大，其中以东北棉团铁线莲中含量最高；本方法操作简单，并呈现出良好的灵敏度、稳定性、专属性，适用于对5-HMF的含量进行测定。关键词威灵仙，5-羟甲基糠醛，含量测定，高效液相色谱法
目 录
1 引言 1
1.1 威灵仙的化学成分 1
1.2 威灵仙的药理作用 2
1.3 威灵仙质量控制的含量测定分析 3
1.4 研究目的及意义 4
2 实验仪器与试剂 4
2.1 实验试剂 4
2.2 实验仪器 5
3 实验内容 5
3.1 提取工艺优化 5
3.2 正交设计考察 5
3.3 HPLC样品制备 6
3.4 HPLC分析条件优化 7
4 结果与分析 7
4.1 系统适用性 7
4.2 方法学考察 8
4.3 威灵仙的含量测定 9
结论 10
致谢 11
参考文献 12
引言
1.1 威灵仙的化学成分
威灵仙化学成分较复杂，主要分为挥发性成分和非挥发性成分两大类，非挥发性成分包含范围较广，主要有三萜皂苷、黄酮、生物碱等；挥发性成分主要是挥发油等。李佳等[1]指出威灵仙中挥发性成分主要为棕榈酸、亚油酸，这两种物质占总挥发性成分的50%左右；另外有学者发现威灵仙在水煮炮制过程中会产生5羟甲基糠醛（5HMF），但对其具体性质以及含量测定方法未作进一步研究。
1.1.1 非挥发性成分
1 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
.1.1.1 皂苷类化合物
皂苷在许多中药材中都存在，威灵仙中的主要是五环三萜皂苷，皂苷元是齐墩果酸以及常春藤皂苷元[2]。三萜类化合物主要是由30个碳原子构成的萜类化合物，少数为27个碳原子，通式为（C5H8）6。三萜类（triterpenes）在自然界中很常见，有些游离存在于植物体中，称为三萜皂苷元（Triterpenoid sapogenins）；有些与糖连系成苷，称为三萜皂苷（Triterpenoid saponins）。Xu[3]等从威灵仙中分得11种皂苷，其中3种为从未发现过的化合物；李淑子等[4]从东北铁线莲的茎和叶中分离得3O乙酰基齐墩果酸12烯（3Oacetyl12en oleanlinacid）和18α齐墩果酸（18αoleanlic acid）。
1.1.1.2 黄酮及多元酚类
黄酮类化合物（flavonoids）是普遍存在于绿色植物内，是一种有利于健康的色素。Dong C X[5]等从棉团铁线莲中分离得到了12个黄酮类化合物，有大豆素、染料木素（genistein）等；多元酚就是连有多个酚羟基的酚，是酚类化合物的总称，主要包括苯酚、萘酚、蒽酚等。Shi S P[6]等从东北铁线莲中分离到3个新的酚苷化合物：Clemomandshuricosides A、B、C，还有1个简单酚酸类化合物。
1.1.1.3 生物碱类
生物碱是碱性有机化合物，分子中含有氮，一般存在于植物，种类众多，结构复杂，对于中草药来讲是一种重要的成分，具有明显的生物活性。生物碱在威灵仙中也起着重要的作用。Shi S P[7]等通过实验，从东北铁线莲的根中分离出了3个生物碱：甲基7乙氧基3吲哚碳酸盐、甲基7OαL吡喃鼠李糖基（（1→6）βD吡喃葡萄糖基3吲哚碳酸盐和αL吡喃鼠李糖基（1→6）βD吡喃葡萄糖基3吲哚碳酸盐，前人并未发现。
1.1.1.4 微量元素
关于微量元素（trace element）没有准确的解释说明以及定义，顾名思义就是含量少的意思，通常意义上，规定元素含量小于0.1%的称为微量元素。宋文漪[8]等取江西、庐山的威灵仙，取其根部，经烘干、磨碎、灼烧后，将样品移入烧杯，加适量浓盐酸，溶解透明后稀释作为样品溶液，经分光光度计检测，发现威灵仙中含有丰富的Fe、Zn、Cu等微量元素，威灵仙能降血糖，正是因为微量元素的存在，能补充胰岛素中的Zn、Cu等。
1.1.2 挥发性成分
赵燕强等[9]人通过实验发现威灵仙中挥发性成分主要是挥发油，是发挥药理作用的主要物质。江滨[10]直接取威灵仙样本，蒸馏得液体，为黄色粘稠状。将样品进行分析得质谱图，发现威灵仙挥发油中共有61个成分。辛广等[11]将东北铁线莲粉碎后用水浸泡，同时利用旋转蒸发仪蒸发浓缩，得透明液体，具有特殊香味。经检测发现了7种成分，其中2环戊烯1，4酮的含量最高。何明等[12]将蒸馏提取后的药渣减压浓缩得威灵仙浸膏，经检测后发现挥发性成分共约7种。然后进行了GCMS测定分析，发现其精华部分为有机酸、有机酸酯、倍半萜、苯丙素、酚类。
1.2 威灵仙的药理作用
1.2.1 镇痛抗炎作用
周效思[13]等人将威灵仙水提液稀释备用，利用热板法研究威灵仙的镇痛作用，结果表明威灵仙对小鼠具有明显的镇痛作用，取小鼠耳部为样本，以肿胀度为考察指标，用耳肿胀法研究威灵仙的抗炎作用，结果显示威灵仙组的肿胀度较轻，说明威灵仙具有良好的抗炎作用；刘光耀[14]等将威灵仙不同部位磨粉、溶解、浓缩后制成浸膏，然后加入纯水溶解至所需浓度，加入到培养的小鼠细胞中进行培养。结果表明威灵仙不同部位均对炎症因子具有抑制作用；章蕴毅[15]等通过处死豚鼠，取其回肠，分次加入威灵仙，发现威灵仙注射液可以使豚鼠的回肠放松，但是多次给药后药效可能会减弱；苗明三[16]等人取威灵仙煎煮液作用于小鼠，发现各品种威灵仙均具有良好的解热镇痛作用，与剂量呈正相关，可有效缓解临床肿痛症状。
1.2.2 抗菌作用
徐小云[17]等指出煎煮后的威灵仙能抑制金黄色葡萄球菌、志贺痢疾杆菌的生长，原始的白头翁素和它的氨基白头翁素有可能是有效成分。张敏[18]研究发现白头翁素可能是威灵仙中的抑菌成分。

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/zygc/67569.html